[誘導体化GASクロマトグラフィー - トリプル四重極質量分析によるプレドニゾロン中のヒドラジンの測定]

プレドニゾロンは、臨床治療で広く搾取されている免疫抑制、抗炎症、抗アレルギー、および抗ウイルス効果を伴う副腎糖質コルチコイド薬です。プレドニゾロンへのヒドラジン残留物は、投薬の安全性に直接影響し、患者の健康を脅かします。現在、自宅または海外の薬物におけるヒドラジンの残留制限を制御するための関連する法律、規制、および基準はありません。したがって、プレドニゾロン中の微量ヒドラジンの測定には、シンプルで、迅速で、正確で、信頼性があり、敏感で、選択的な方法が緊急に必要です。ヒドラジンは、不安定な物理的および化学的特性を備えた強い極性と還元性を持ち、したがって容易に酸化されます。さらに、発色団の不足と低分子量のため、ヒドラジンの検出は非常に困難です。したがって、その極性を減らし、高分子量と安定した物理的および化学的特性を備えた誘導体生成物を生成するために、誘導体試薬を導入する必要があります。一般的な実験室試薬としてのアセトンは安価であり、ヒドラジンと急速に反応する可能性があります。したがって、それはヒドラジンの測定に理想的な誘導体試薬です。この研究では、誘導体化試薬、GCおよびMS条件、溶剤システム、および誘導体化を最適化することにより、ガスクロマトグラフィートリプル四重極質量分析（GC-MS/MS）による前ly式誘導体化に基づく方法（GC-MS/MS）は、プレドニゾロン中のヒドロジンの測定のために開発されました。条件。次に、確立された方法を使用してメソッド検証が実行され、結果は満足のいくものでした。この研究では、1 gのプレドニゾロンサンプルを計量し、プラグ付きの10 mL遠心管に入れました。次に、メタノールジクロロメタン希釈溶媒（14∶23、v/v）をスケールラインに加え、サンプルを完全に溶解するまでボルテックスしました。上記の約100μLの試験溶液をサンプルバイアルにピペットで塗り、その後900μlのアセトンを添加しました。得られたソリューションは渦巻き、よく混合されました。サンプルをアセトン溶液、アセトン/メタノール - ジクロロメタン希釈溶媒（9∶1、v/v）で同時に誘導し、同時に誘導体化し、GC-MS/MSによって検出および分析しました。この研究では、ヒドラジンとアセトンの間の誘導体化反応は、酢酸と超音波条件の添加、または抽出手術のための他の試薬の使用を必要としませんでした。反応は瞬間的であり、プレドニゾロン中のヒドラジンの急速な測定を達成できました。標準曲線は、範囲1〜12μg/Lの良好な相関係数（R2 = 0.9999）で得られました。検出と定量の限界は、それぞれ0.03 mg/kgと0.10 mg/kgでした。注入精度の相対標準偏差（RSD）は1.10％でした。回復と再現性は良かった。低濃度、中濃度のスパイクサンプルの回収率は、それぞれ1、6、および12μg/Lのスパイク濃度で96.15％-96.46％であり、対応するRSDは1.77％-2.12％でした。中間精度は良好であり、異なる時間に異なる実験室技術者によって同じ機器で得られた決定結果のRSDは1.77％でした。耐久性は良好であり、検出結果の影響の程度は、クロマトグラフィー条件を変更することで研究されました。初期のカラム温度±5℃、加熱速度±2°/min、またはカラム流量±0.1 ml/minの元の条件下では、6μg/Lのスパイク濃度でサンプル溶液中のヒドラジン含有量が検出されました。、および検出結果のRSDは2.58％でした。確立された方法は、製薬会社が提供するプレドニゾロンサンプルの市場から調達されたプレドニゾロン標準物質のヒドラジンを検出するために適用されました。これらのサンプルのいずれでもヒドラジンは検出されませんでした。確立された方法は、シンプルで信頼性が高く、非常に敏感で、非常に選択的であり、プレドニゾロン中のヒドラジンの検出に適用できます。

Prednisolone is an adrenal glucocorticoid drug with immunosuppressive, anti-inflammatory, anti-allergic, and antiviral effects that are widely exploited in clinical treatment. The hydrazine residue to prednisolone directly affects medication safety and threatens the patient's health. At present, there are no relevant laws, regulations, and standards to control the residual limit of hydrazine in drugs at home or abroad. Therefore, a simple, rapid, accurate, reliable, sensitive, and selective method is urgently needed for the determination of trace hydrazine in prednisolone. Hydrazine has strong polarity and reductivity, with unstable physical and chemical properties, thus being easily oxidized. In addition, because of the lack of chromophores and low molecular weight, the detection of hydrazine is very difficult. Therefore, a derivative reagent should be introduced to reduce its polarity and generate a derivative product with a high molecular weight as well as stable physical and chemical properties. Acetone, as a common laboratory reagent, is inexpensive and can rapidly react with hydrazine; therefore, it is an ideal derivative reagent for the determination of hydrazine. In this study, a method based on precolumn derivatization with gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry (GC-MS/MS) was developed for the determination of hydrazine in prednisolone by optimizing the derivatization reagent, GC and MS conditions, solvent system, and derivatization conditions. Method validation was then carried out using the established method, and the results were satisfactory. In this study, 1 g of prednisolone sample was weighed and placed in a 10 mL centrifuge tube with a plug; then, a methanol-dichloromethane dilution solvent (14∶23, v/v) was added to the scale line, and the sample was vortexed until completely dissolved. About 100 μL of the test solution prepared above was pipetted into the sample vial, followed by the addition of 900 μL acetone. The resulting solution was vortexed and mixed well. The sample was diluted and derivatized simultaneously in acetone solution, acetone/methanol-dichloromethane dilution solvent (9∶1, v/v), and then detected and analyzed by GC-MS/MS. In this study, the derivatization reaction between hydrazine and acetone did not require the addition of acetic acid and ultrasound conditions, or the use of other reagents for the extraction operation. The reaction was instantaneous, and rapid determination of hydrazine in prednisolone could be achieved. The standard curve was obtained with a good correlation coefficient (r2=0.9999) in the range 1-12 μg/L. The limits of detection and quantitation were 0.03 mg/kg and 0.10 mg/kg, respectively. The relative standard deviation (RSD) of injection precision was 1.10%. The recoveries and repeatability were good; the recoveries of low-, medium-, and high-concentration spiked samples were 96.15%-96.46% at spiked concentrations of 1, 6, and 12 μg/L, respectively, and the corresponding RSDs were 1.77%-2.12%. The intermediate precision was good, and the RSD of the determination results obtained on the same instrument by different laboratory technicians at different times was 1.77%. The durability was good, and the degree of influence of the detection results was studied by changing the chromatographic conditions. Under the original condition or conditions with initial column temperature ±5 ℃, heating rate ±2 ℃/min, or column flow rate ±0.1 mL/min, the hydrazine content in the sample solution at a spiked concentration of 6 μg/L was detected, and the RSD of the detection results was 2.58%. The established method was applied to detect hydrazine in a prednisolone standard substance procured from the market and nine batches of prednisolone samples provided by a pharmaceutical company. No hydrazine was detected in any of these samples. The established method is simple, reliable, highly sensitive, and highly selective, and it can be applied for the detection of hydrazine in prednisolone.