UHPLC-MS/MSを使用して、ヒトの青年およびマウス血漿中の炎症性およびプロの分解脂質メディエーターの定量的プロファイリング

目的：脂質メディエーターは、炎症を調節するのに役立つ生物活性脂質です。58の炎症誘発性および分解促進脂質メディエーターを定量化して、青年の予備的参照範囲を決定し、総総額を調査するために、超高性能液体クロマトグラフィータンデム質量分析（UHPLC-MS/MS）法を開発することを目指しました。オメガ-3多価不飽和脂肪酸（N-3 PUFA）またはN-6 PUFAベースの脂質エマルジョンを含む非経口栄養（TPN）は、血漿の脂質メディエーター濃度に影響します。 方法：脂質メディエーターをSPEを使用して血漿から抽出し、UHPLC-MS/MSを使用して測定しました。EDTA血漿は、13歳から17歳までの健康な青年から収集され、予備的な参照範囲を決定し、N-3 PUFAまたはN-6 PUFAベースの脂質エマルジョンを含む7日間静脈内TPNを投与されたマウスから収集されました。 結果：いくつかのロイコトリエン、プロスタグランジン、レゾビン、保護、マレーシン、リポキシンを含む精度と回復を備えた、ヒト血漿中の43の脂質メディエーターを正確に定量化しました。血液分離後のヒト血漿へのメタノールの添加により、12-ヒドロキシエイコサテトラエノ酸（12-heTe）、12-ヒドロキシエイコサペンタ酸（12-HEPE）、12S-ヒドロキシエイコサトリエン酸（12S-ヘトレ酸）の血液抽選後の増加が減少することがわかりました。-hydroxydocosahexaeno酸（14-HDHA）およびトロムボキサンB2（TXB2）。N-6 PUFAベースのTPNと比較して、N-3 PUFAベースのTPNは、マレーシン1（MAR1）、MAR2、Protectin D1（PD1）、PDX、およびResolvin D5（RVD5）などの特殊な分解媒体を増加させ、減少し、減少しました。ロイコトリエンB4（LTB4）やプロスタグランジンD2（PGD2）などの炎症性脂質メディエーター。 結論：私たちの方法は、血漿サンプルから58人の脂質メディエーターの正確で敏感な定量化を提供します。これは、思春期の血漿サンプルにおける脂質メディエーターの予備的な参照範囲を確立するために使用しました。N-6 PUFAリッチTPNと比較して、N-3 PUFAがマウスの炎症性脂質メディエータープロファイルが少ないことを示すために。

OBJECTIVES: Lipid mediators are bioactive lipids which help regulate inflammation. We aimed to develop an ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) method to quantify 58 pro-inflammatory and pro-resolving lipid mediators in plasma, determine preliminary reference ranges for adolescents, and investigate how total parenteral nutrition (TPN) containing omega-3 polyunsaturated fatty acid (n-3 PUFA) or n-6 PUFA based lipid emulsions influence lipid mediator concentrations in plasma. METHODS: Lipid mediators were extracted from plasma using SPE and measured using UHPLC-MS/MS. EDTA plasma was collected from healthy adolescents between 13 and 17 years of age to determine preliminary reference ranges and from mice given intravenous TPN for seven days containing either an n-3 PUFA or n-6 PUFA based lipid emulsion. RESULTS: We successfully quantified 43 lipid mediators in human plasma with good precision and recovery including several leukotrienes, prostaglandins, resolvins, protectins, maresins, and lipoxins. We found that the addition of methanol to human plasma after blood separation reduces post blood draw increases in 12-hydroxyeicosatetraenoic acid (12-HETE), 12-hydroxyeicosapentaenoic acid (12-HEPE), 12S-hydroxyeicosatrienoic acid (12S-HETrE), 14-hydroxydocosahexaenoic acid (14-HDHA) and thromboxane B2 (TXB2). Compared to the n-6 PUFA based TPN, the n-3 PUFA based TPN increased specialized pro-resolving mediators such as maresin 1 (MaR1), MaR2, protectin D1 (PD1), PDX, and resolvin D5 (RvD5), and decreased inflammatory lipid mediators such as leukotriene B4 (LTB4) and prostaglandin D2 (PGD2). CONCLUSIONS: Our method provides an accurate and sensitive quantification of 58 lipid mediators from plasma samples, which we used to establish a preliminary reference range for lipid mediators in plasma samples of adolescents; and to show that n-3 PUFA, compared to n-6 PUFA rich TPN, leads to a less inflammatory lipid mediator profile in mice.