中国のマカダミア・テルニフォリアの魔女産の病気に関連する「カンジダス・ファトプラズマ・アスタリス」の最初の報告

マカダミア・ナット（マカダミア・テルニフォリア）は、1910年にオーストラリアから中国に初めて導入され、主な栽培地域は雲南と広州でした。それは、高い経済的価値を持つ果物と治療薬の両方として使用できます。2021年3月、M。ternifoliaが中国の雪州県デホン県で魔女、葉の黄変、胎児の芽を見せていたことが観察されました。感染した植物の末端芽を阻害し、外側芽は刺激され、事前に小枝に発芽します。M. Ternifolia Witches'-Broom病と名付けられ、Mangshi、Lianghe、Yingjiang、Mangdong、Longchuan、Longling Cities and郡の都市部と農村部で発見されました。調査対象の7つの地域には、植物の40％以上が感染しました。症候性および無症候性の植物からの外側の茎は、小さな断片に切断されました。組織は、固定、脱水、噴霧金により治療されました。そして、組織は走査型電子顕微鏡（Hitachi S-3000N）で観察されました（Pathan etal。2010）。ほぼ球状の体は、症候性植物の師部ふるい細胞で見つかりました。症候性および無症候性の植物は7つの領域から収集され、DDH2Oがネガティブコントロールとして使用され、ドドナエアが魔女の疾患植物を陽性対照として使用しました。総植物のDNA抽出は、CTAB法（Porebski etal。1997）を使用して0.1 g組織から実施され、南西林業大学の森林災害警告と管理の主要な研究所の冷蔵庫に-20°Cで保存されました。。ネストされたPCRは、プライマーP1/P7およびR16F2/R16R2を使用して16S RRNA遺伝子を増幅するために使用されました（Lee etal。1993; Schneider etal。1993）。1.8 kbと1.2 kbのPCRアンプリコンが増幅されました（Genbank Accessions MW892818、MW892819、MW892820、MW892821）。リボソームタンパク質（RP）遺伝子に特異的なプライマーペアRP（I）F/ RP（I）R（Lee etal。2003）の直接PCRは、約1.2 kbのアンプリコンを生成しました（Genbank accessions MZ442600、MZ442601、MZ442602、MZ442603）。21のサンプルの断片は陽性対照と一致しており、植物生物と疾患との関連を確認しました。興味深いことに、植物生物/SPAN> 16S RRNA遺伝子とRP遺伝子も、無症候性植物の4つのサンプルから増幅され、潜在的な感染と隠れた症状がマカダミアナッツに存在すると推測しました（Moslemkhani and Sadeghi 2011）。MTWB植物プラズマの16S rRNA配列の爆発分析により、Trema laevigata Witches'-B-B-B-B-B-B-B-B-BORM PHYTOPLASMA（GenBank Accession MG755412）と99％の類似性があることが示されました。RPシーケンスは、「Salix Tetradenia 'Witches」-Broom Phytoplasma（GenBank Accession KC117314）と99％の同一性を共有しました。Ipyclassifierを使用した分析では、MTWB植物プラズマのクエリ16S RDNAフラグメントに由来する仮想RFLPパターンは、16SRグループI、サブグループB（OY-M、GenBank Accession AP006628）の参照パターンに最も類似していることが示されました。0.99の。植物プラズマは「CA。サブグループ16SRI-Bに属するアスタリス関連株に属する植物生物腫に関連するひずみ。系統樹は、16Sバージョン6.0（Tamura etal。2013）を使用して16S RRNA遺伝子とRP遺伝子配列に基づいて構築され、隣接結合（NJ）メソッドとブートストラップサポートが1000の複製で推定されました。結果は、MTWB植物プラズマがそれぞれ16SRI-BとRPI-Bでサブクレードを形成したことを示しています。2013年、マカダミアナットは葉の硬度を示し、「Ca。キューバのアルテミザにある植物生物asteris '。懸念は、マカダミアの植物プラズマがサブグループ16SRI-Fと密接に関連しており、中国の株とは大きく異なることです（Pérez-Lópezetal。2013）。さらに、MTWB植物プラズマは、保育園条件で感染した植物から健康な植物から移植された移植片を移植されました（Akhtar etal。2009; Ikten etal。2014）。そして、移植された植物は、ネストされたPCRアッセイの植物プラズマにとって陽性でした。植物がアブラムシによって深刻な損傷を受けたことは注目に値し、ホモプテラの昆虫が植物の樹液を吸うことによって病気のspread延を引き起こし、したがって、中国でMTWBを伝達するアブラムシをM.セルニフォリアの魔女を制御するために決定しなければならないと推測されました。 - ブルーム病。私たちの知る限り、マカダミア・ナットは「ca。中国における植物生物類asteris。新しく出現した病気は、マカダミアナッツに対する脅威です。

Macadamia nut (Macadamia ternifolia) was first introduced into China from Australia in 1910, and the main cultivation areas were Yunnan and Guangxi. It can be used as both a fruit and a therapeutic drug, with high economic value. In March 2021, it was observed that the M. ternifolia was showing witches'-broom, leaf yellowing and plexus bud in Dehong Prefecture, Yunnan Province, China. The terminal buds of infected plants were inhibited and the lateral buds are stimulated to germinate into twigs in advance. It was named the M. ternifolia witches'-broom disease, and was found in urban and rural areas of Mangshi, Lianghe, Yingjiang, Mangdong, Longchuan and Longling cities and counties. More than 40% of the plants were infected on the seven areas surveyed. The lateral stems from symptomatic and asymptomatic plants were cut to small pieces. The tissues were treated by fixation, dehydration and spraying-gold. And the tissues were observed under a scanning electron microscope (Hitachi S-3000N) (Pathan et al. 2010). The nearly spherical bodies were found in the phloem sieve cells of symptomatic plants. Symptomatic and asymptomatic plants were collected from seven areas, ddH2O was used as the negative control, and Dodonaea viscose witches'-broom disease plants were used as the positive control. The total plants' DNA extraction was conducted from 0.1 g tissue using the CTAB method (Porebski et al. 1997), and were stored at -20 °C in a refrigerator in the Key Laboratory of Forest Disaster Warning and Control at the Southwest Forestry University. The nested PCR was employed to amplify the 16S rRNA gene with the primers P1/P7 and R16F2/R16R2 (Lee et al. 1993; Schneider et al. 1993). PCR amplicon of 1.8 kb and 1.2 kb were amplified (GenBank accessions MW892818, MW892819, MW892820, MW892821). The direct PCR with primer pairs rp(I)F/ rp(I)R (Lee et al. 2003) specific to the ribosomal protein (rp) gene yielded amplicons of approximately 1.2 kb (GenBank accessions MZ442600, MZ442601, MZ442602, MZ442603). The fragment from 21 samples was consistent with the positive control, confirming the association of phytoplasma with the disease. Interestingly, the phytoplasma/span>16S rRNA gene and rp gene was also amplified from the 4 samples of asymptomatic plant, we speculated that the latent infection and hidden symptoms existed in Macadamia nut (Moslemkhani and Sadeghi 2011). A BLAST analysis of the 16S rRNA sequences of MTWB phytoplasma showed that it has a 99% similarity with Trema laevigata witches'-broom phytoplasma (GenBank accession MG755412). The rp sequence shared 99% identity with 'Salix tetradenia' witches'-broom phytoplasma (GenBank accession KC117314). An analysis with iPhyClassifier showed that the virtual RFLP pattern derived from the query 16S rDNA fragment of MTWB phytoplasma is most similar to the reference pattern of the 16Sr group I, subgroup B (OY-M, GenBank accession AP006628), with a pattern similarity coefficient of 0.99. The phytoplasma is identified as 'Ca. Phytoplasma asteris'-related strain belonging to sub-group 16SrI-B. The phylogenetic tree was constructed based on 16S rRNA gene and rp gene sequences by using MEGA version 6.0 (Tamura et al. 2013) with neighbor-joining (NJ) method and bootstrap support was estimated with 1000 replicates. The result indicated that the MTWB phytoplasma formed a subclade in 16SrI-B and rpI-B respectively. In 2013, Macadamia nut showed leaf hardness phyllody and shoot proliferation caused by 'Ca. Phytoplasma asteris' in Artemisa, Cuba. The concern is that, the macadamia phytoplasma is closely related to the subgroup 16SrI-F, and it is significantly different from the Chinese strains (Pérez-López et al. 2013). In addition, the MTWB phytoplasma was graft-transmitted from infected to healthy plants in nursery conditions (Akhtar et al. 2009; Ikten et al. 2014). And the grafted plants were positive for the phytoplasma in the nested PCR assays. It is noteworthy that the plants were seriously damaged by aphid and it was speculated that the insects of Homoptera caused the spread of the disease by sucking plant sap, thus the aphids that transmits MTWB in China must be determined to control the M. ternifolia witches'-broom disease. To the best of our knowledge, Macadamia nut is a new host plant of 'Ca. Phytoplasma asteris' in China. The newly emerged disease is a threat to Macadamia nut.