液体クロマトグラフィータンデム質量分析による大豆および大豆生成物中のレクチンの定量化

レクチンは、大豆の主要な抗栄養因子の1つであり、食事性タンパク質の消化を阻害します。ここでは、合成ペプチド183TTSWDLANNK192を使用したレクチンを参照標準および対応する同位体標識ペプチドTTSWDLANNK（アラニン-13C3,15N）として内部標準として検出するための絶対的な定量化方法が開発されました。挽いた大豆と大豆生成物をN-ヘキサンで脱脂し、抽出バッファーで抽出した後、粗タンパク質抽出物をトリプシンによってろ膜上に消化しました。さらに、酵素加水分解ペプチドは、液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用して定量化されました。合成参照ペプチドは、0.27 ng/mLの検出限界と3.2-1000 ng/mL（R2> 0.997）の範囲で線形関係を示しました。それに対応して、大豆サンプルのレクチンの検出限界は35.5μg/gでした。結果は、スパイクサンプル中のレクチンの回収率が80.9％から108.7％の範囲で、日中の精度（％CV）が9％未満であることを示しました。この方法は、さまざまな品種からの数百の大豆種子のレクチンレベルと、さまざまな大豆加工技術の大豆製品のレクチンレベルを評価するために成功裏に使用されました。さらに、この方法は、食物におけるさまざまなタンパク質抗栄養因子の超高感度検出の一般的な方法として潜在的なアプリケーションを提供する可能性があります。

Lectin is one of the major anti-nutritional factors in soybeans and inhibits digestion of dietary protein. Here, an absolute quantification method was developed to detect lectin using synthetic peptide 183TTSWDLANNK192 as reference standard and corresponding isotope labeled peptide TTSWDLANNK (Alanine-13C3,15N) as internal standard to normalize results. After the ground soybeans and soy products were defatted with n-hexane and extracted with extraction buffer, the crude protein extract was digested on filter membrane by trypsin. Further, the enzymatic hydrolysis peptides were quantified using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The synthetic reference peptide showed a detection limit of 0.27 ng/mL and a linear relationship in the range of 3.2-1000 ng/mL (r2 > 0.997). Correspondingly, the detect limit of lectin in soybean samples was 35.5 μg/g. The results showed that the recoveries of the lectin in spiked samples ranged from 80.9% to 108.7% with intra-day precisions (% CV) less than 9%. The method was successfully used to evaluate lectin levels in hundreds of soybean seeds from different varieties and soy products from different soybean processing techniques. Furthermore, the method may provide a potential application as a general method for the ultrasensitive detection of various protein anti-nutritional factors in food.