RNF168 E3リガーゼは、DNAクロスリンク修復中にユビキチンシグナル伝達とSLX4の動員に参加します

SLX4/FANCPは、パートナーのXPFヌクレアーゼによるDNAインターストランドクロスリンク（ICL）の周りの切開のための重要なファンコニ貧血（FA）タンパク質であり、DNA修復足場です。SLX4のタンデムUBZ4ユビキチン結合ドメインは、K63結合ポリビキチン鎖に結合することにより、おそらくSLX4の損傷部位に補充するために重要です。ただし、SLX4の動員を媒介するユビキチンE3リガーゼの同一性は不明のままです。SLX4のGFPタグ付きN末端半分（SLX4-Nと呼ばれる）を使用した小さな干渉RNA（siRNA）スクリーニングを使用して、RNF168 E3リガーゼをマイトマイシンC（MMC）誘発SLX4焦点形成の重要な因子として特定します。RNF168およびGFP-SLX4-Nは、MMC誘導ユビキチン病巣に共局在します。Psoralen-Laser ICLトラックでのSLX4-Nの蓄積またはジゴキシゲニン-Psoralen/UVA ICLでの内因性SLX4の蓄積は、RNF168に依存しています。最後に、RNF168はMMC許容範囲を促進する際にSLX4を備えた表現性があることがわかります。RNF168は、SLX4をICL損傷に募集する信号変換の重要なコンポーネントであると結論付けています。

SLX4/FANCP is a key Fanconi anemia (FA) protein and a DNA repair scaffold for incision around a DNA interstrand crosslink (ICL) by its partner XPF nuclease. The tandem UBZ4 ubiquitin-binding domains of SLX4 are critical for the recruitment of SLX4 to damage sites, likely by binding to K63-linked polyubiquitin chains. However, the identity of the ubiquitin E3 ligase that mediates SLX4 recruitment remains unknown. Using small interfering RNA (siRNA) screening with a GFP-tagged N-terminal half of SLX4 (termed SLX4-N), we identify the RNF168 E3 ligase as a critical factor for mitomycin C (MMC)-induced SLX4 foci formation. RNF168 and GFP-SLX4-N colocalize in MMC-induced ubiquitin foci. Accumulation of SLX4-N at psoralen-laser ICL tracks or of endogenous SLX4 at Digoxigenin-psoralen/UVA ICL is dependent on RNF168. Finally, we find that RNF168 is epistatic with SLX4 in promoting MMC tolerance. We conclude that RNF168 is a critical component of the signal transduction that recruits SLX4 to ICL damage.