n-アセチルシステインを使用した剥離液乳細胞からの幹細胞の腺芽細胞分化の増強-An in vitro研究

目的と目的：この研究は、ヒト剥離乳歯（SHED）からの幹細胞の伝播と分化に対するN-アセチルシステイン（NAC）の効果を評価するために実施されました。 材料と方法：SHEDは外植片培養法によって分離され、フローサイトメトリー法を使用して幹細胞特性を特徴づけました。MTTアッセイおよび細胞カウントKIT-8（CCK-8）アッセイを使用して、SHEDの生存率と増殖を調べました。SHEDのNAC誘発性骨/歯芽球性分化の効果は、鉱化のための機能的染色によって決定され、骨/歯芽細胞転写因子およびタンパク質の遺伝子発現は、リアルタイムの定量的逆転写 - ポリメラーゼ反応（QRT-PCR）によって評価されました。分析。コラーゲン1型（COL1）、象牙質シアリンリンタンパク質（DSPP）、および象牙質マトリックス酸性リンタンパク質1（DMP-1）のタンパク質レベルは、オステ/歯原性分化を評価するためにウエスタンブロット法によって計算されました。 結果：SHEDは、フローサイトメトリー分析で間葉系幹細胞（MSC）様特性を示しました。SHEDの細胞生存率と代謝活性は、0.5〜10 nmにNAC濃度の増加とともに増加しました。ただし、0.5〜2.5 mmのNACの濃度は細胞増殖に影響しませんでした。2.5 mmの濃度で組み込まれたNACは、RUNT関連転写因子2（RUNX2）、COL1A1、DSPP、およびDMP-1のより高い鉱化とかなり増加した遺伝子発現レベルを示しました。Col1、DSPP、DMP-1のようなオドント芽細胞関連マトリックスタンパク質のタンパク質発現を大幅に増加させました。 結論：NACは、in vitroで歯科幹細胞の健全な伝播を調節します。歯肉小屋の分化に対する影響は、身元不明のままです。この研究では、NACがSHEDの鉱化作用を促進し、それらを歯芽球の系統に区別できることを調査しています。 臨床的意義：結果は、NACが歯科幹細胞の歯原性分化を活性化および強化する上で重要な薬理学的役割を有する可能性があることを提案し、おそらく再生歯科の見通しです。

AIM AND OBJECTIVE: The study was conducted to evaluate the effects of N-acetylcysteine (NAC) on the propagation and differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth(SHED). MATERIALS AND METHODS: SHEDs were isolated by explant culture method and characterized for stem cell properties using flow cytometry method. MTT assay and Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay were used to examine the viability and proliferation of the SHEDs. The effects of NAC-induced osteo/odontoblastic differentiation of SHEDs were determined by functional staining for mineralization, and the gene expression of osteo/odontoblastic transcription factors and proteins was evaluated by real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(qRT-PCR) analyses. Protein levels of collagen type 1 (COL1), dentin sialophosphoprotein (DSPP), and dentin matrix acidic phosphoprotein 1(DMP-1) were calculated by the Western blot method to assess the osteo/odontogenic differentiation. RESULTS: SHEDs presented mesenchymal stem cell (MSC)-like characteristics on flow cytometric analysis. The cell viability and metabolic activity of SHEDs were increased with an increase in the concentrations of NAC from 0.5 to 10 nM. However, the concentrations of NAC from 0.5 to 2.5 mM did not affect cell proliferation. NAC incorporated at a concentration of 2.5 mM showed higher mineralization and considerably increased gene expression levels of runt-related transcription factor 2 (RUNX2), COL1A1, DSPP, and DMP-1. It significantly increased the protein expression of odontoblast-related matrix proteins like COL1, DSPP, and DMP-1. CONCLUSION: NAC regulates the healthy propagation of dental stem cells in vitro. Its effects on the differentiation of dental pulp SHEDs remain unidentified. This study explores that NAC can encourage the mineralization of SHEDs and differentiate them into the odontoblastic lineage. CLINICAL SIGNIFICANCE: The results propose that NAC could have a significant pharmacological role in activating and enhancing odontogenic differentiation of dental stem cells and possibly a prospect in regenerative dentistry.