ヒト末梢血からの調節T細胞の調製と機能に関する研究

背景：調節T細胞（Treg）は、CD4+ T細胞の重要な細胞サブグループです。Treg細胞は、免疫耐性の誘発、免疫環境の恒常性の維持、および自己免疫疾患の発生を防ぐことに非常に関与しています。通常の条件下では、体内のTregの数は非常に少ないです。この研究は、in vitroでヒトの末梢血Tregを拡大し、拡大後のTreg細胞の表現型、純度、および機能を分析するための効果的な方法を確立するように設計されました。 方法：末梢血は健康なドナーから得られました。CD4+CD25+CD127DIM/ - Treg細胞は、磁気活性化細胞選別（MAC）によって末梢血単核細胞（PBMC）から単離され、最適化された培養システムが増幅に使用されました。Treg細胞のin vitro増幅能力を評価して、異なる培養サイクルにおけるTreg細胞特異的表面マーカーの発現と純度を決定しました。Tregの抑制機能は、in vitroリンパ球増殖アッセイによって決定されました。 結果：TREG細胞は、磁気活性化細胞ソート（MACS）によって正常に分離される可能性があります。in vitro培養の21日後、平均膨張の折り畳みは60年以下で2,009±452.2であり、若いグループと60年以上のグループの間に有意差がありました（1,238±330.0）。フローサイトメトリー分析により、CD4+ CD25+細胞とFOXP3+細胞の割合は、14日目の（93.25±3.05）％および（94.19±4.21）％であり、（92.86±4.36）％および（91.55±5.62）％であることが21日目の（91.55±5.62）であることが明らかになりました。、 それぞれ。さらに、CD8+ T、CD19+ B、CD3-CD56+ナチュラルキラーセル（NK）、およびCD3+ CD56+ナチュラルキラーT細胞（NKT）の割合は非常に低かった。リンパ球増殖アッセイは、TregがCD4+ T細胞のそれよりもCD8+ T細胞の増殖をより効果的に阻害できることを実証しました。さらに、Tregsの抑制能力は、TregとPBMCS比と相関していました。 結論：in vitroで高効率の大量のTregを製造するための技術的なプロトコルを成功裏に確立しました。拡張されたTregは、安定したFoxp3発現を持ち、強力な免疫抑制を示しました。これは、移植片対宿主疾患および自己免疫疾患の治療に養子縁組療法に非常に重要である可能性があります。

BACKGROUND: Regulatory T cells (Tregs) are an important cell subgroup of CD4+ T cells. Treg cells are critically involved in inducing immune tolerance, maintaining immune environment homeostasis, and preventing the occurrence of autoimmune diseases. Under normal conditions, the number of Tregs in the body is very small. This research was designed to establish an effective method to expand human peripheral blood Tregs in vitro and to analyze phenotype, purity, and function of Treg cells post-expansion. METHODS: Peripheral blood was obtained from healthy donors. CD4+CD25+CD127dim/- Treg cells were isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) by magnetic-activated cell sorting (MACS), and an optimized culture system was used for amplification. The in vitro amplification ability of Treg cells was evaluated to determine the expression and purity of Treg cell-specific surface markers in different culture cycles. The suppressive function of Treg was determined by in vitro lymphocyte proliferation assay. RESULTS: Treg cells could be successfully isolated by magnetic activated cell sorting (MACS). After 21 days of in vitro culture, the mean expansion fold was 2,009±452.2 in ≤60 years, and there was a significant difference between the younger group and the older than 60 years group (1,238±330.0). Flow cytometry analysis revealed that the percentages of CD4+CD25+ cells and FOXP3+ cells were (93.25±3.05)% and (94.19±4.21)% on day 14, and (92.86±4.36)% and (91.55±5.62)% on day 21, respectively. In addition, the proportions of CD8+ T, CD19+ B, CD3-CD56+ natural killer cell (NK), and CD3+ CD56+ natural killer T cell (NKT) were extremely low. Lymphocyte proliferation assay demonstrated that Tregs could inhibit the proliferation of CD8+ T cells more effectively than that of CD4+ T cells. Furthermore, the suppressive capacity of Tregs was correlated with Treg-to-PBMCs ratios. CONCLUSIONS: We successfully established a technical protocol for manufacturing a large quantity of Tregs with high efficiency in vitro. The expanded Tregs have a steady FOXP3 expression and exhibited a potent immune suppression, which might have great significance in adoptive Treg therapy for treating graft-versus-host disease and autoimmune diseases.