NLRP3インフラマソームのmiR-16-5pおよびTXNIP調節を介したアテローム性動脈硬化症に対するアルテスナートの抗炎症効果

背景：アテローム性動脈硬化症（AS）は慢性炎症性動脈障害です。ArtesunateはASで抗炎症活性を示す可能性がありますが、ASでの役割はまだ初期段階にあります。この研究では、ASおよびその根本的なメカニズムのARTESUNATEの抗炎症効果を調査しました。 方法：115人の冠動脈性心臓病（CHD）患者の末梢血（PB）および冠動脈血管造影によって確認された33人の非CHD患者のCD14+単球を分離しました。ホルボールミリステートアセテート（PMA）を使用して、THP-1単球のマクロファージへの分化を誘導しました。細胞を、2.5、5、または10 µmol/Lの最終濃度で標準層で処理しました。NLRP3インフラマソームの活性化は、カスパーゼリクルートメントドメイン（ASC）を含むアポトーシス関連スペック様タンパク質の免疫ブロットによって評価されました。プロカスパーゼ-1/pro-interleukin（IL）-1β/pro-IL-18の発現とその成熟型は、免疫ブロッティングを使用して測定されました。ビタミンD3（VD3）と21日間の高脂肪食によって誘導されたASのラットモデル。 結果：ダウンレギュレートされたmiR-16-5pとアップレギュレートされたチオレドキシン相互作用タンパク質（TXNIP）は、CHD患者のCD14+単球で決定され、疾患の重症度に関連しています。Artesunateは、培養マクロファージ内のインフラマソーム活性化因子の存在下で、NLRP3インフラマソームの活性化を廃止しました。Artesunateは、TXNIPの発現を減少させ、TXNIPとNLRP3の間の相互作用を損なうため、培養マクロファージでの炎症性サイトカインの放出とASC産生を阻害しました。さらに、miR-16-5pは、TXNIPのメッセンジャーRNA（mRNA）を負に調節しました。Artesunateは、用量依存的にmiR-16-5pの発現を増加させ、miR-16-5pの阻害により炎症性サイトカインの分泌が促進されました。我々のin vivo実験はまた、Artesunateが脂質蓄積、アテローム硬化性プラーク形成、および拮抗された炎症を、miR-16-5pを上方制御することにより、用量依存的に拮抗することを実証しました。 結論：要約すると、本研究では、ASのアルテスマートの抗炎症の役割の根底にあるメカニズムを発表しました。

BACKGROUND: Atherosclerosis (AS) is chronic inflammatory arterial disorder. Artesunate could exhibit anti-inflammatory activity in AS, but its role in AS is still in its incipient stage. In this study, we explored the anti-inflammatory effect of artesunate in AS and its underlying mechanism. METHODS: We isolated CD14+ monocytes from peripheral blood (PB) of 115 coronary heart disease (CHD) patients and 33 non-CHD patients confirmed by coronary angiography. Phorbol myristate acetate (PMA) was used to induce the differentiation of THP-1 monocytes to macrophages. Cells were treated with artesunate at a final concentration of 2.5, 5 or 10 µmol/L. The activation of NLRP3 inflammasome was assessed by immunoblotting of apoptosis-associated speck-like protein containing caspase recruitment domain (ASC). The expression of pro-caspase-1/pro-interleukin (IL)-1β/pro-IL-18 and their mature forms was measured using immunoblotting. A rat model of AS was induced by vitamin D3 (VD3) and a 21-day high-fat diet. RESULTS: Downregulated miR-16-5p and upregulated thioredoxin-interacting protein (TXNIP) was determined in CD14+ monocytes from CHD patients and associated with disease severity. Artesunate abrogated the activation of NLRP3 inflammasome in the presence of inflammasome activators in cultured macrophages. Artesunate reduced TXNIP expression and impaired the interaction between TXNIP and NLRP3, thereby inhibiting release of inflammatory cytokines and ASC production in cultured macrophages. In addition, miR-16-5p negatively regulated the messenger RNA (mRNA) of TXNIP. Artesunate increased the expression of miR-16-5p in a dose-dependent manner, and inhibition of miR-16-5p enhanced the secretion of inflammatory cytokines. Our in vivo experiments also demonstrated that artesunate reduced lipid accumulation, atherosclerotic plaque formation, and antagonized inflammation in a dose-dependent manner by upregulating miR-16-5p. CONCLUSIONS: In summary, the present study unveiled a mechanism underlying the anti-inflammatory role of artesunate in AS.