ヒト単球性白血病細胞株、THP-1によって生成されるコロニー刺激因子の特性

ヒト単球性白血病細胞株であるTHP-1は、メゼリンへの暴露後にマクロファージ様特性を獲得します。メゼリン活性化細胞によって条件付けられた血清を含まない培地は、マウス骨髄培養を伴うアッセイにコロニー刺激因子（CSF）活性を含むことが観察されました。Isoelectrofofofocusingは、CSF活性が電荷の不均一性を示し、4.4〜5.3のPL範囲で移動したことを明らかにしました。ニューラミニダーゼによる治療は生物活性に影響を与えませんでしたが、電荷の不均一性を低下させました。ニューラミニダーゼ処理CSFのレイソフォーカスは、PL 4.9での活性のピークを明らかにしました。活性成分は、タンパク質分解切断に耐性があるが、2-メルカプトエタノールによって完全に不活性化された酸性シログリコタンパク質であることが示されました。このCSFは、THP-1コンディショニングされた血清を含まない培地から精製されており、分化イソエレクトロフォーカス、セファクリルS-200、DEAE-セファセル、ニューラミニダーゼ処理、トリスグリシネートポリアクリアミドゲル電気式のイオン交換クロマトグラフィー（ページ）により精製されています。SDS-PAGEからの溶出により、70,000ダルトンの見かけの分子量に対応する単一の活動のピークが明らかになりました。コロニーにおける骨髄細胞の予備的特性評価は、THP-1細胞がマクロファージ特異的CSFを産生することを示しました。

The human monocytic leukemia cell line, THP-1, acquires macrophage-like characteristics following exposure to mezerein. Serum-free medium conditioned by mezerein-activated cells was observed to contain colony-stimulating factor (CSF) activity in assays with murine bone marrow cultures. Isoelectrofocusing revealed that CSF activity displayed charge heterogeneity and migrated in a pl range of 4.4-5.3. Treatment with neuraminidase did not affect biological activity but did reduce charge heterogeneity. Reisofocusing of neuraminidase-treated CSF revealed a peak of activity at pl 4.9. The active component was shown to be an acidic sialoglycoprotein, resistant to proteolytic cleavage but completely inactivated by 2-mercaptoethanol. This CSF has been purified from THP-1-conditioned serum-free medium by preparative isoelectrofocusing, gel filtration through Sephacryl S-200, ion exchange chromatography on DEAE-Sephacel, neuraminidase treatment, and tris-glycinate polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Elution from SDS-PAGE revealed a single peak of activity corresponding to an apparent molecular weight of 70,000 daltons. Preliminary characterization of the bone marrow cells in colonies showed that THP-1 cells produced macrophage-specific CSF.