進行表面アブレーション（ASA）手術で除去された上皮細胞は、角膜サンプルの供給源として使用して、in vitro研究を実施できます。

in vitroで角膜の病態生理を研究するには、ヒト角膜上皮細胞が必要です。細胞株の限界により、一次細胞の使用は非常に望ましいものですが、倫理的な問題とともに人間の組織の不足は、必要なすべての実験を達成することを困難にします。高度な表面アブレーション（ASA）では、中央の角膜上皮が除去され、廃棄されます。ASAサンプルを使用してin vitroアッセイを実行できると仮定しました。この研究では、ASAを受けている患者からの29のサンプルを、補足されたDMEM/F12培地、RIPAバッファー、またはRLT溶解バッファーで回収しました。最初の目的は、細胞を培養で維持できるかどうかを判断することでした。外植片技術では、組織の断片は培養表面に付着しませんでしたが、分解後、細胞は高い生存率（90.0±6.0％）を示し、プレートに取り付けられ、最大14日間生存可能でした。2番目の目的は、ASAサンプルを使用してタンパク質または遺伝子の発現を研究できるかどうかを解明することでした。サイトケラチン-3、ZO-1、KI67、およびE-カドヘリンタンパク質の発現は、免疫蛍光により確認されました。総タンパク質（485.8±115.8μg）をRIPA緩衝液中の細胞から分離し、GAPDHがウエスタンブロットで検出され、サンプルがタンパク質研究に適していることを示しています。RNA（9.0±3.6μg）をRLT溶解バッファーのサンプルから分離し、GAPDH遺伝子発現をPCRによって研究し、サンプルも遺伝子発現研究にも適していることを確認しました。これらの結果は、角膜表面アブレーション手順から得られたサンプルが、in vitro研究を達成するために人間の細胞の貴重な供給源を構成する可能性があることを示唆しています。

Human corneal epithelial cells are needed to study corneal pathophysiology in vitro. Due to the limitations of cell lines, the use of primary cells is highly desirable, but the scarcity of human tissues, along with ethical issues, make it difficult to accomplish all required experiments. In advanced surface ablation (ASA), the central corneal epithelium is removed and discarded. We hypothesized that ASA samples could be used to perform in vitro assays. In this study, 29 samples from patients undergoing ASA were recovered in supplemented DMEM/F12 culture medium, RIPA buffer, or RLT lysis buffer. The first aim was to determine whether cells could be maintained in culture. Although with the explant technique, tissue pieces did not attach to the culture surface, after disaggregation, cells showed high viability (90.0 ± 6.0%), attached to plates, and remained viable for up to 14 days. The second aim was to elucidate if ASA samples could be used to study protein or gene expression. Cytokeratin-3, ZO-1, Ki67, and E-cadherin protein expression were confirmed by immunofluorescence. Total protein (485.8 ± 115.8 μg) was isolated from cells in RIPA buffer, and GAPDH was detected by Western blotting, indicating that samples are adequate for protein studies. RNA (9.0 ± 3.6 μg) was isolated from samples in RLT lysis buffer, and GAPDH gene expression was studied by PCR, confirming that samples were also suitable for gene expression studies. These results suggest that samples obtained from corneal surface ablation procedures may constitute a valuable source of human cells to accomplish in vitro studies.