[PCSK9のノックダウンは、ヒト大動脈内皮細胞の内皮から間葉への移行を阻害します]

目的プロプロテインコンバーターゼサブチリシン/ケキシン9型（PCSK9）の保護効果を調査することは、ヒト大動脈内膜細胞（haecs）におけるβグリセロリン酸、デキサメタゾン、およびL-アスコルビン酸によって誘導される内皮から葉系遷移（ENDOMT）のノックダウン。方法EndomTモデルは、100 nmol/Lのデキサメタゾンと50μg/mLのL-アコルビン酸を組み合わせた（0、10、30、50）mmol/Lのβグリセロリン酸を誘導することにより確立されました。HAECにPCSK9の特定の小さな干渉RNA（SI-PCSK9）をトランスフェクトし、HAECのPCSK9のmRNAおよびタンパク質発現レベルは、リアルタイムの定量的PCRおよびウエスタンブロッティングによって検出されました。HAECは、ブランクグループ、ENDOMT群、ネガティブコントロールの小干渉RNA（SI-NC）をトランスフェクトしたENDOMTグループ、およびSi-PCSK9をトランスフェクトしたENDOMTグループにランダム化しました。α-滑らかな筋肉アクチン（α-SMA）、線維芽細胞特異的タンパク質1（FSP1）、および血管内皮カドヘリン（VE-カドヘリン）のmRNAレベルは、リアルタイムの定量的PCR、α-SMAおよびα-SMAおよびタンパク質レベル、およびα-SMAおよびタンパク質レベルによって検出されました。VE-カドヘリンはウエスタンブロッティングによって検出され、α-SMAの発現は免疫蛍光染色によって検出されました。結果30 mmol/Lのβグリセロリン酸は、エンドムトの誘導に最適な効果があり、PCSK9 mRNAとタンパク質の発現は、エンドムが発生したときにアップレギュレートされました。PCSK9ノックダウン後、α-SMAとFSP1の発現はダウンレギュレートされ、VEカドヘリンの発現はアップレギュレートされました。結論PCSK9のノックダウンは、HAECの内部を阻害します。

Objective To investigate the protective effect of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) knockdown on endothelial-to-mesenchymal transition (EndoMT) induced by β glycerophosphate, dexamethasone, and L-ascorbic acid in human aortic endothelial cells (HAECs). Methods EndoMT model was established by inducing HAECs with (0, 10, 30, 50) mmol/L of β glycerophosphate combined with 100 nmol/L of dexamethasone and 50 μg/mL of L-ascorbic acid. HAECs were transfected with specific small interfering RNA of PCSK9 (si-PCSK9), and the mRNA and protein expression levels of PCSK9 in HAECs were detected by real-time quantitative PCR and Western blotting. HAECs were randomized into blank group, EndoMT group, EndoMT group transfected with negative control small interfering RNA (si-NC), and EndoMT group transfected with si-PCSK9. The mRNA levels of α-smooth muscle actin (α-SMA), fibroblast-specific protein 1 (FSP1), and vascular endothelial cadherin (VE-cadherin) were detected by real-time quantitative PCR, the protein levels of α-SMA and VE-cadherin were detected by Western blotting, and the expression of α-SMA was detected by immunofluorescence staining. Results 30 mmol/L of β glycerophosphate had the best effect in inducing EndoMT, and the expression of PCSK9 mRNA and protein was up-regulated when EndoMT occurred. After PCSK9 knockdown, the expressions of α-SMA and FSP1 were down-regulated, while the expression of VE cadherin was up-regulated. Conclusion Knockdown of PCSK9 inhibits the EndoMT of HAECs.