細菌MTTアッセイのフォルマザン溶解の改善

水溶性の黄色がかったテトラゾリウム塩3-（4,5-ジメチルチアゾール）-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化物（MTT）の酵素的減少に基づくMTTアッセイは、細胞の評価に一般的に使用されます。生存率と増殖。MTTアッセイによる正確な性能は、細胞とホルマザンの完全な可溶化と色付き溶液の安定性に依存します。異なる溶解溶液の比較により、アンモニア緩衝液、pH 10で緩衝され、5％SDSを含むジメチルホルムアミド（DMF）とジメチルスルホキシド（DMSO）が最良の結果をもたらすことが明らかになりました。これらの2つの溶媒は、700 nmでのバックグラウンド吸光度を最小限に抑え、少なくとも24時間の良好な再現性（低感度、高感度、色安定性を備えた、ホルマザンと細胞の迅速かつ完全な可溶化を提供しました。生存可能な細胞数とホルマザン吸光度の間の線形関係は、グラム陰性およびグラム陽性微生物について、最大約1×109細胞/mLの細胞密度について保存されていました。MTTは、細胞の非存在下で中程度の成分によって減少する可能性があるため、すべての中程度の成分を含むブランクは同時に細胞を実行する必要はありません。2つの波長（570 nm）の吸収ピーク（570 nm）とピーク（700 nm）から遠く離れたバックグラウンド吸光度に対応する2つの波長での測定は、不完全な溶解と濁度のためにアーティファクトを避けるために必要です。水溶性テトラゾリウム塩3-（4,5-ジメチルチアゾール）-2,5ジフェニル - テトラゾリウムブロマイド（MTT）の重要性の還元は、紫色の水溶性ホルマザンから、細胞の生存率と増殖の評価に一般的に使用されます。ホルマザンの分光光度検出には、その可溶化が必要です。可溶化溶媒は、データ収集に強い影響を及ぼし、しばしばアーティファクトを導入し、結果の誤読につながります。この研究では、MTTテストが微生物学的培養に適用されるときに可溶化アーティファクトを最小限に抑える溶媒の選択肢を提供します。

The MTT assay, based on the enzymatic reduction of the water-soluble, yellowish tetrazolium salt 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) to purple formazan, is commonly used for assessment of cell viability and proliferation. Accurate performance by the MTT assay depends on complete solubilization of cells and formazan and stability of the colored solution. Comparison of different solubilization solutions revealed that dimethylformamide (DMF) and dimethyl sulfoxide (DMSO), buffered with ammonia buffer, pH 10, and containing 5% SDS, produced the best results. These two solvents provided rapid and complete solubilization of formazan and cells, with minimal background absorbance at 700 nm, good reproducibility (low interassay coefficient of variation), high sensitivity, and color stability for at least 24 h. A linear relationship between viable-cell number and formazan absorbance was preserved for cell densities up to ∼1 × 109 cells/mL for Gram-negative and Gram-positive microorganisms. Since MTT can be reduced by medium components in the absence of cells, blanks containing all medium components but no cells should be run simultaneously. Measurements at two wavelengths, one corresponding to absorption peak of formazan (570 nm) and a background absorbance far from the peak (700 nm), are necessary to avoid artifacts due to incomplete solubilization and turbidity. IMPORTANCE Reduction of the water-soluble tetrazolium salt 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5 diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) to purple, water-insoluble formazan is commonly used for assessment of cell viability and proliferation. Spectrophotometric detection of formazan requires its solubilization. The solubilization solvent has a strong influence on data acquisition and often introduces artifacts, leading to misreading of results. This study offers a choice of solvents that minimize solubilization artifacts when the MTT test is applied to microbiological cultures.