オライチャネル関数の阻害は、MAST細胞のMAS関連Gタンパク質共役受容体媒介反応を調節します

マスト細胞（MC）は、アレルギー障害の病因に重要な役割を果たす組織在住の免疫細胞です。これらの応答は、抗原により細胞表面高親和性IgE受容体（FCϵRI）の架橋を介して媒介され、カルシウム（Ca2+）動員を引き起こし、炎症誘発性メディエーターの脱顆粒と放出が続きます。FCϵRIに加えて、皮膚MCSはMAS関連Gタンパク質共役受容体X2（MRGPRX2;マウスオーソログMRGPRB2）を発現します。神経ペプチド物質P（SP）によるMRGPRX2/B2の活性化は、神経原性炎症、慢性ur麻疹、肥満細胞症およびアトピー性皮膚炎に関係しています。MRGPRX2/B2を介したMC応答にはCa2+の侵入が必要ですが、これらの応答に関与するカルシウム放出活性化カルシウム（CRAC/Orai）チャネルがテストされていない可能性があります。ヒトMC系統（LAD2細胞）におけるOrai1、Orai2またはOrai3のレンチウイルスshRNAを介したサイレンシングは、SP誘発Ca2+動員、脱顆粒およびサイトカイン/ケモカイン生成（TNF-α、IL-8、およびCCL-3 -3 -3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3-3のレンチウイルスshRNA媒介サイレンシングをもたらしました。）。オライチャネルのHOMOおよびヘテロダイメリゼーションをブロックするSynta66は、個々のオライチャネルのノックダウンよりもSP誘導反応のより堅牢な阻害を引き起こしました。Synta66はまた、SP誘発性細胞外シグナル調節キナーゼ1/2（ERK1/2）およびAKTリン酸化をブロックし、サイトカイン/ケモカイン産生を廃止しました。また、原発性ヒト皮膚MCおよびマウス腹膜MCのSP誘導Ca2+動員と脱顆粒を阻害しました。さらに、Synta66は、マウス腹膜におけるSP誘発性皮膚血管透過性と白血球動員の両方を減衰させました。これらの発見は、オライチャネルがMRGPRX2/B2を介したMC活性化に寄与していることを示しており、それらの阻害がSP誘導MC/MRGPRX2媒介障害の変調のための新しいアプローチを提供できることを示唆しています。

Mast cells (MCs) are tissue resident immune cells that play important roles in the pathogenesis of allergic disorders. These responses are mediated via the cross-linking of cell surface high affinity IgE receptor (FcϵRI) by antigen resulting in calcium (Ca2+) mobilization, followed by degranulation and release of proinflammatory mediators. In addition to FcϵRI, cutaneous MCs express Mas-related G protein-coupled receptor X2 (MRGPRX2; mouse ortholog MrgprB2). Activation of MRGPRX2/B2 by the neuropeptide substance P (SP) is implicated in neurogenic inflammation, chronic urticaria, mastocytosis and atopic dermatitis. Although Ca2+ entry is required for MRGPRX2/B2-mediated MC responses, the possibility that calcium release-activated calcium (CRAC/Orai) channels participate in these responses has not been tested. Lentiviral shRNA-mediated silencing of Orai1, Orai2 or Orai3 in a human MC line (LAD2 cells) resulted in partial inhibition of SP-induced Ca2+ mobilization, degranulation and cytokine/chemokine generation (TNF-α, IL-8, and CCL-3). Synta66, which blocks homo and hetero-dimerization of Orai channels, caused a more robust inhibition of SP-induced responses than knockdown of individual Orai channels. Synta66 also blocked SP-induced extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and Akt phosphorylation and abrogated cytokine/chemokine production. It also inhibited SP-induced Ca2+ mobilization and degranulation in primary human skin MCs and mouse peritoneal MCs. Furthermore, Synta66 attenuated both SP-induced cutaneous vascular permeability and leukocyte recruitment in mouse peritoneum. These findings demonstrate that Orai channels contribute to MRGPRX2/B2-mediated MC activation and suggest that their inhibition could provide a novel approach for the modulation of SP-induced MC/MRGPRX2-mediated disorders.