未熟で熟したazadirachta indica（neem）種子抽出物の抗生物質および抗がん活動

背景：病原体と乳がんの抗生物質耐性は、新しい代替戦略の検索を必要とします。植物抽出物は、微生物媒介性疾患と、従来の抗生物質と比較して副作用が低い癌を根絶することができます。 AIM：未熟で熟したアザディラッハインディカ（ニーム）種子抽出物は、MDR乳癌細胞株に対する抗癌剤と同様に、多剤耐性感染細菌と闘う際に、潜在的な抗フィルムおよび抗がん剤として調査されました。 方法：小屋乾燥ニーム種子（未熟で熟した両方）を粉砕し、メタノールを使用して抽出しました。化学成分は、FTIRおよびガスクロマトグラフィー - 質量分析で同定されました。ニーム種子抽出物の抗生物質活性は、最小バイオフィルム阻害濃度（MBIC）、最小バイオフィルム根絶濃度（MBEC）、および黄色ブドウ球菌およびビブリオコレアに関する蛍光顕微鏡研究の観点から評価されました。細菌細胞は、染色剤としてアクリジンオレンジ/エチジウム臭化物を使用して、蛍光顕微鏡で研究されました。抗菌活性を観察するために、最小阻害濃度（MIC）および最小殺菌濃度（MBC）値を評価しました。ヒト血液リンパ球に対する抽出物の細胞毒性および薬物耐性乳癌細胞株に対する抗がん活性は、3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（MTT）アッセンスおよび蛍光により評価されました。活性化細胞ソート（FACS）研究。 結果：4-エチル-2-ヒドロキシ-2-シクロペンテン-1-オン、フタル酸、および2-ヘキシル - テトラヒドロチオファンは、未熟ニーム種子の主要な化合物でしたが、3,5-ジヒドロキシ-6-メチル-2、3-dihydro-4-H-Pyran-4-Oneおよび4-エチルベンズアミドは、熟したニームの種子で優勢でした。両方の抽出物でもトリアジン誘導体が一般的でした。黄色ブドウ球菌の未熟で熟したニーム種子抽出物のMBIC値は、それぞれ75および100 µg/mlであり、V。choleraeの場合、それらはそれぞれ100および300 µg/mlです。未熟および熟した種子抽出物のMBEC値は、それぞれS. aureusおよびV. choleraeの場合、それぞれ500および300 µg/mlです。値はそれぞれ700および500 µg/mlです。細菌培養後の16時間および24時間での蛍光顕微鏡研究は、両方の細菌の未熟な種子よりも熟した種子抽出物の抗ファイルム活性の強化を示しています。MTTアッセイは、熟した種子抽出物の優れた活性による乳癌細胞株（MDA-MB-231）に対する正常な血液リンパ球への両方の抽出物の細胞毒性が低いことを明らかにします。FACS研究は、熟した種子抽出物のより高い抗がん活性をさらにサポートしました。 結論：ニーム種子のメタノール抽出物は、強力な抗菌および抗がん活性とともに、バイオフィルムを実質的に阻害および根絶することができました。両方の抽出物は、V。cholerae（グラム陰性）よりもS. aureus（グラム陽性）に対するより高い抗生物質および抗菌活性を示しました。さらに、熟した種子抽出物は、未熟な抽出物よりも高い抗生物質と抗癌活性を示しました。

BACKGROUND: Antibiotic resistances of pathogens and breast cancer warrant the search for new alternative strategies. Phytoextracts can eradicate microbe-borne diseases as well as cancer with lower side effects compared to conventional antibiotics. AIM: Unripe and ripe Azadirachta indica (neem) seed extracts were explored as potential antibiofilm and anticancer agents in combating multidrug-resistant infectious bacteria as well as anticancer agents against the MDR breast cancer cell lines. METHODS: Shed-dried neem seeds (both unripe and ripe) were pulverized and extracted using methanol. The chemical components were identified with FTIR and gas chromatography - mass spectrometry. Antibiofilm activity of neem seed extracts were assessed in terms of minimum biofilm inhibitory concentration (MBIC), minimum biofilm eradication concentration (MBEC), and fluorescence microscopic studies on Staphylococcus aureus and Vibrio cholerae. Bacterial cells were studied by fluorescence microscopy using acridine orange/ethidium bromide as the staining agents. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) values were evaluated to observe the antibacterial activities. Cytotoxicity of the extracts against human blood lymphocytes and the anticancer activity against drug-resistant breast cancer cell lines were assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and fluorescence-activated cell sorting (FACS) studies. RESULTS: 4-Ethyl-2-hydroxy-2-cyclopentene-1-one, phthalic acid, and 2-hexyl-tetrahydro thiophane were the major compounds in unripe neem seed, whereas 3,5-dihydroxy-6-methyl-2,3-dihydro-4-H-pyran-4-one and 4-ethylbenzamide were predominant in ripe neem seed. Triazine derivatives were also common for both the extracts. MBIC values of unripe and ripe neem seed extracts for S. aureus are 75 and 100 µg/mL, respectively, and for V. cholerae, they are 100 and 300 µg/mL, respectively. MBEC values of unripe and ripe seed extracts are 500 and 300 µg/mL, respectively for S. aureus and for V. cholerae the values are 700 and 500 µg/mL, respectively. Fluorescence microscopic studies at 16 and 24 h, after bacterial culture, demonstrate enhanced antibiofilm activity for the ripe seed extract than that of the unripe seeds for both the bacteria. MTT assay reveals lower cytotoxicity of both the extracts towards normal blood lymphocytes, and anticancer activity against breast cancer cell line (MDA-MB-231) with superior activity of ripe seed extract. FACS studies further supported higher anticancer activity for ripe seed extract. CONCLUSIONS: Methanolic extract of neem seeds could substantially inhibit and eradicate biofilm along with their potent antibacterial and anticancer activities. Both the extracts showed higher antibiofilm and antibacterial activity against S. aureus (gram-positive) than V. cholerae (gram-negative). Moreover, ripe seed extract showed higher antibiofilm and anticancer activity than unripe extracts.