免疫グロブリンアロタイプとアイソタイプスイッチバリアントを生成する相同染色体組換え

モノクローナル抗体産生ハイブリドーマにおける自発性アイソタイプスイッチングが、同じ染色体上の遺伝子で常に発生するかどうかを調査しました。（BAB/ 25 X AKR/ J）F1マウスの脾臓細胞、ダンシルキーホールリンペットヘモシアニン（DNS-KLH）で免疫し、NS-1でハイブリダイズして、BまたはDハプロタ型のモノクローナル抗DNS抗体を生成するハイブリドーマを生成します。BAB/25またはAKR/Jの親のそれぞれ。蛍光活性化細胞ソーター（FACS）を使用して、このようなハイブリドーマのアイソタイプスイッチバリアントを選択しました。ほとんどの場合、親とスイッチバリアントハイブリドーマによって発現するアロタイプハプロタイプは同じですが、バリアントの1つのファミリーでは、アイソタイプのスイッチとともにハプロタイプの切り替えに注目しました。これは、元々IgG3産生の親から派生したIgG1スイッチバリアントからのIgG2Aスイッチバリアントの選択に注目されました。生化学的および分子研究は、アロタイプスイッチバリアントが親ハイブリドーマと同じ重鎖可変領域遺伝子複合体を発現することを確認しています。そのため、アロタイプスイッチは、免疫グロブリン重鎖遺伝子間の自発的な有糸分裂組換えの例を表しており、以前に異なる染色体に配置されていた遺伝子座から単一のアクティブに転写された遺伝子を生成します。

We investigated whether spontaneous isotype switching in monoclonal antibody-producing hybridomas always occurs with genes on the same chromosome. Spleen cells of (BAB/ 25 X AKR/J) F1 mice, immunized with dansyl-keyhole limpet hemocyanin (DNS-KLH), were hybridized with NS-1 to generate hybridomas producing monoclonal anti-DNS antibodies of either the b or d haplotype of the BAB/25 or AKR/J parent, respectively. We selected isotype switch variants of such hybridomas using the fluorescence-activated cell sorter (FACS). Although in most cases the allotypic haplotype expressed by the parent and switch-variant hybridomas are the same, in one family of variants we noted a switch in haplotype along with the switch in isotype. This was noted in the selection of IgG2a switch variants from an IgG1 switch variant originally derived from an IgG3-producing parent. Biochemical and molecular studies confirm that the allotype switch variant expresses the same heavy-chain variable region gene complex as its parent hybridomas. As such, the allotype switch represents an example of spontaneous mitotic recombination between immunoglobulin heavy-chain genes, generating a single actively transcribed gene from loci previously positioned on different chromosomes.