Trypanosoma cruziのメタサイクリックトリポマスティゴテによる代替補体経路の回避：表面タンパク質とN結合炭水化物の発達的に調節された合成への依存

Trypanosoma cruziのエピマスティゴート（EPI）は、代替補体経路（ACP）による新鮮な正常なヒト血清の溶解に非常に敏感です。対照的に、静止培養におけるEPIに由来するメタサイクリックトリポマスティゴテ（CMT）はACPを活性化することができず、したがって血清媒介溶解に耐性があります。感染性メタサイクリックトリポマスティゴテがACPを回避できるようにする寄生表面分子の性質を調査するために、CMTはさまざまな異なるタンパク質分解およびグリコシド酵素で処理され、ACP依存性溶解に対する感受性がテストされました。プロナゼによる前処理は、CMTの血清溶解に対する耐性にほぼ完全な反転を引き起こすことがわかったが、トリプシンまたはキモトリプシンは補体感受性の小さな増加を誘発した。同様に、N-グリカーカーゼまたはニューラミニダーゼによる前処理も、ACP依存性溶解に対するCMTの耐性を部分的に廃止しました。補体媒介溶解に対する感受性に対するこれらの酵素の効果は、生物に対するC3およびC9沈着の増加に類似していた。さらに、寄生虫結合C3の電気泳動分析は、溶血性の不活性な断片であるIC3BがCMT上の分子の主要な形態であり、溶血性活性フラグメントであるC3Bがプロナゼ処理CMTで優勢であることを示しました。さらに、精製ACP成分によってC3が寄生虫表面に堆積した場合、Pronase前処理CMT上のC3Bの80％がCMPのC3Bの14％のみが増幅タンパク質因子Bを高親和性で結合し、効率的なACPの前提条件であり、活性化。Pronase処理後37度Cで培養すると、CMTは徐々にACPを介した溶解に対する耐性を取り戻しました。このプロセスは、プロマイシン、シクロヘキシミド、またはチュニカマイシンが培地に含まれている場合にブロックされました。上記の発見は、CMTによるACPの回避が、タンパク質の発達的に調節された合成およびN結合炭水化物鎖に依存していることを示唆しています。ステージ固有の90,000〜115,000 M.W.CMTの表面に存在する糖タンパク質ダブレットは、プロナース消化に対して独自に敏感であることが示されました。したがって、CMT特異的モノクローナル抗体によっても認識されているこの複合体は、ACP活性化の制御に関与する糖タンパク質成分である可能性があります。

Epimastigotes (EPI) of Trypanosoma cruzi are highly sensitive to lysis in fresh normal human serum by the alternative complement pathway (ACP). In contrast, metacyclic trypomastigotes (CMT) derived from EPI in stationary culture fail to activate the ACP and are thus resistant to serum-mediated lysis. To investigate the nature of the parasitic surface molecules which enable infective metacyclic trypomastigotes to evade the ACP, CMT were treated with a variety of different proteolytic and glycosidic enzymes, and their sensitivity to ACP-dependent lysis was tested. Pretreatment with pronase was found to cause a near complete reversal in the resistance of CMT to serum lysis, whereas trypsin or chymotrypsin induced smaller increases in complement sensitivity. Similarly, pretreatment with N-glycanase or neuraminidase also partially abrogated the resistance of CMT to ACP-dependent lysis. The effect of these enzymes on susceptibility to complement-mediated lysis was paralleled in increased C3 and C9 deposition on the organism. In addition, electrophoretic analysis of parasite-bound C3 indicated that the hemolytically inactive fragment, iC3b, was the major form of the molecule on CMT, while the hemolytically active fragment, C3b, predominated on pronase-treated CMT. Furthermore, when C3 was deposited on the parasite surface by means of purified ACP components, 80% of C3b on pronase-pretreated CMT but only 14% of the C3b on CMT bound the amplification protein factor B with high affinity, a prerequisite for efficient ACP activation. When cultured at 37 degrees C after pronase treatment, CMT gradually regained their resistance to ACP-mediated lysis. This process was blocked if puromycin, cycloheximide, or tunicamycin were included in the culture medium. The above findings suggest that evasion of the ACP by CMT is dependent on the developmentally regulated synthesis of protein as well as N-linked carbohydrate chains. A stage-specific 90,000 to 115,000 m.w. glycoprotein doublet present on the surface of CMT was shown to be uniquely sensitive to pronase digestion. Thus, this complex, which is also recognized by a CMT-specific monoclonal antibody, may be the glycoprotein component responsible for control of ACP activation