犬の組織球肉腫におけるIBA-1およびCD204を標的とする分子診断技術としてのRNA in situハイブリダイゼーション

背景：犬の組織球肉腫（HS）は、形態学的にさまざまな特徴を備えた攻撃的な癌です。したがって、決定的な診断を取得することは困難な場合があります。2つのタンパク質、IBA-1、イオン化カルシウム結合アダプター分子1、およびマクロファージスカベンジャー受容体であるCD204は、同様の形態学的特徴を持つ他の腫瘍タイプとHSを区別するのに役立つ特定の免疫組織化学マーカーであることが示されています。 目的：この研究は、犬のHSの診断のための分子ツールとしてのホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織としてのシングル分子RNAの視覚化を可能にするin situハイブリダイゼーション（ISH）テクノロジーの使用を実証するために実施されました。 方法：IBA-1およびCD204の逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）およびウエスタンブロット分析を実施して、組織球肉腫DH82細胞株におけるこれら2つのマーカーの遺伝子発現とタンパク質発現を相関させました。IBA-1およびCD204用のRNA-ishをDH82細胞株で実行して、RNA-ishプローブを検証しました。RNA-ISHおよび免疫組織化学（IHC）を臨床HS FFPEサンプルで実施して、IBA-1およびCD204のmRNAとタンパク質発現を実証しました。FFPEは、犬の丸い細胞腫瘍、黒色腫、未分化肉腫のサンプルをネガティブコントロールとして使用しました。 結果：RNA-ISHとIHCは、犬Dh82細胞株とアーカイブされた犬HSサンプルの両方で、腫瘍細胞でIBA-1およびCD204の中程度から強い発現を示しました。RNA-ISHおよびIHCは、大型麻薬浸潤と一致して、対照腫瘍サンプルに散乱陽性染色を示しました。 結論：CD204およびIBA-1のRNA-ishは、サンプルに高い特異性と感度を持っているようであり、HSを識別するための追加の貴重な診断手法である可能性があります。

BACKGROUND: Canine histiocytic sarcoma (HS) is an aggressive cancer with morphologically variable features; therefore, obtaining a definitive diagnosis can be challenging. Two proteins, IBA-1, ionised calcium-binding adapter molecule 1, and CD204, a macrophage scavenger receptor, have been shown to be specific immunohistochemical markers helpful in distinguishing HS from other tumour types with similar morphological features. OBJECTIVES: This study was performed to demonstrate the use of RNA in situ hybridisation (ISH) technology allowing single-molecule RNA visualisation in formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues as a molecular tool for the diagnosis of canine HS. METHODS: Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blot analysis for IBA-1 and CD204 were performed to correlate gene expression and protein expression of these two markers in the histiocytic sarcoma DH82 cell line. RNA-ISH for IBA-1 and CD204 was performed on the DH82 cell line to validate the RNA-ISH probes. RNA-ISH and immunohistochemistry (IHC) were performed in clinical HS FFPE samples to demonstrate mRNA and protein expression of IBA-1 and CD204. FFPE archived samples of canine round cell tumours, melanoma and anaplastic sarcoma were used as negative controls. RESULTS: RNA-ISH and IHC showed moderate to strong expression for IBA-1 and CD204 in the neoplastic cells in both the canine DH82 cell line and the archived canine HS samples. RNA-ISH and IHC showed scattered positive staining in the control tumours samples, consistent with macrophagic infiltration. CONCLUSION: RNA-ISH for CD204 and IBA-1 appeared to have a high specificity and sensitivity in our samples and may be an additional valuable diagnostic technique in identifying HS.