非コーディングY RNA処理に関する機械的洞察

Y RNA（84-112 NT）は、RNAポリメラーゼIIIによって転写されていない非コーディングRNAであり、特徴的な二次構造によって特徴付けられます。ヒトY RNAは、RONPおよびY RNAと呼ばれるリボ核核タンパク質（RNP）複合体を一緒に形成する自己免疫性タンパク質SSBおよびRO60と相互作用し、DNAおよびRNAの複製とRNAの複製と安定性においても、癌を含む病気に大きな影響を与えます。細胞ストレスとアポトーシス中に、Y RNAはY RNA由来の小RNA（YSRNA）と呼ばれる3 'および5'末端フラグメントに切断されます。ストレス、アポトーシス、癌の一部のysRNA機能は報告されていますが、その基本的な生合成は報告されていません。ここでは、3 'end rny5切断が構造に依存していることを報告します。高スループット変異誘発実験では、高GC含有量を含む二重鎖ステムを上回る2番目と3番目のntの間に切断が発生しました。STEM S3の上の内部ループは、変異体を使用して3 '末端YSRNA（31 NT）を生成するために重要であることを実証します。RNY5の位置22でUggGUシーケンスモチーフが5 '末端YSRNA（22-25 NT）を生成するために重要であることを示しています。無傷のRO60がysRNA生合成に重要であることを示します。リボヌクレアーゼL（RNASEL）は、マウス胚性線維芽細胞のY RNA切断に寄与するが、ヒト細胞で重要なエンドリボヌクレアーゼだけではないと結論付けています。

Y RNAs (84-112 nt) are non-coding RNAs transcribed by RNA polymerase III and are characterized by a distinctive secondary structure. Human Y RNAs interact with the autoimmune proteins SSB and RO60 that together form a ribonucleoprotein (RNP) complex termed RoRNP and Y RNAs also perform regulatory roles in DNA and RNA replication and stability, which has major implications for diseases including cancer. During cellular stress and apoptosis, Y RNAs are cleaved into 3' and 5' end fragments termed Y RNA-derived small RNAs (ysRNAs). Although some ysRNA functions in stress, apoptosis and cancer have been reported, their fundamental biogenesis has not been described. Here we report that 3' end RNY5 cleavage is structure dependent. In high throughput mutagenesis experiments, cleavage occurred between the 2nd and 3rd nt above a double stranded stem comprising high GC content. We demonstrate that an internal loop above stem S3 is critical for producing 3' end ysRNAs (31 nt) with mutants resulting in longer or no ysRNAs. We show a UGGGU sequence motif at position 22 of RNY5 is critical for producing 5' end ysRNAs (22-25 nt). We show that intact RO60 is critical for ysRNA biogenesis. We conclude that ribonuclease L (RNASEL) contributes to Y RNA cleavage in mouse embryonic fibroblasts but is not the only endoribonuclease important in human cells.