大腸菌の直線化プラスミドDNAとの形質転換後の分子内のリサイオ化と欠失形成のメカニズム

線形PBR322 DNAを使用してReca+またはReca-coliを形質転換することによって得られた多くのタイプI（モノマー未満）プラスミドの欠失剤の欠失エンドポイントは、DNA配列決定によって決定されました。単方向および双方向性の両方の削除で、リサイアリゼーション点は通常、線形化されたPBR322分子の各腕に存在する4〜10 bpの直接反復配列間の組換えによって特徴付けられました。多くの場合、組換えの再循環化に関与する途切れない相同性の短い領域が、相対的な非相もの領域に埋め込まれていました。線形プラスミド分子の両端でシーケンスを一致させる確率を予測するモデルが提示されています。線形プラスミド分子の露出した末端のエクソヌクレリ溶解プロセシングは、その後の組換えのリサイクル化と欠失のために基質を生成することが提案されています。再循環線形DNA分子における宿主の組換えおよび修復機能の活性は、遺伝子クローン処置中に得られた異常な組換えDNA構築物の多くの生成を説明します。

The deletion end-points of a number of type I (less than monomeric) plasmid deletants obtained by transforming recA+ or recA- E. coli with linear pBR322 DNA were determined by DNA sequencing. In both monodirectional and bidirectional deletions the recyclization point was normally characterized by recombination between directly repeated sequences of between 4 and 10 bp present on each arm of the linearized pBR322 molecule. Frequently, short tracts of uninterrupted homology involved in recombinational recircularization were embedded in regions of relative non-homology. A model predicting the probability of matching sequences in either end of a linear plasmid molecule is presented. It is proposed that exonucleolytic processing of the exposed termini of linear plasmid molecules generates substrates for subsequent recombinational recyclization and deletion. The activity of host recombination and repair functions in recircularizing linear DNA molecules explains the generation of many of the aberrant recombinant DNA constructs obtained during gene cloning procedures.