慢性HBV患者における循環HBV RNAの検出と定量化のためのCOBAS®HBVRNA自動研究アッセイのパフォーマンス

背景：末梢血中のHBV RNAの量は、感染した肝細胞内のHBVを共有閉じた円形DNA（CCCDNA）転写活性を反映する可能性があります。したがって、循環HBV RNA（CIRB-RNA）の定量化は、抗ウイルス治療を監視するための有望なバイオマーカーです。 目的：RocheCobas®6800/8800システムで使用するための自動化されたプロトタイプの定量的HBV RNAアッセイのパフォーマンスを評価しました。 研究デザイン：COBAS®HBVRNAアッセイのHBV DNAによる感度、特異性、直線性、および潜在的な干渉を、合成HBV装甲RNAおよび臨床標本を使用して評価しました。 結果：COBAS®HBVRNAの結果は、いくつかのHBV遺伝子型の臨床サンプルでは10〜107コピー/mlの間で線形であり、合成RNAで最大109コピー/mlでした。精度と再現性は優れており、標準偏差は0.15 Log10コピー/ml未満で、変動係数は線形範囲全体で5％未満でした。HBV DNAの存在は、DNA：RNA比のHBV RNA定量化に最小の（<0.3 Log10コピー/ml）影響を最小限に抑えました。36の未処理患者サンプルのパネルでは、CIRB-RNA濃度はHBV DNAよりも約200倍低かった。CIRB-RNAは、13人のHBEAG陽性患者すべて（平均6.0 LOG10コピー/mL）および23人のHBEAG陰性患者のうち20人（定量化可能なサンプル2.2 LOG10コピー/mLの平均）で検出されました。最後に、CIRB-RNAは、20人のヌクレオシド類似体治療患者のうち12人で検出されました（定量化可能なサンプル3.4 LOG10コピー/mLの平均）。 結論：COBAS®6800/8800調査HBV RNAアッセイは、慢性B型肝炎患者におけるCIRB-RNA定量化の臨床的関連性を評価するための高スループット、敏感で包括的アッセイです。

BACKGROUND: The amount of HBV RNA in peripheral blood may reflect HBV covalently closed circular DNA (cccDNA) transcriptional activity within infected hepatocytes. Quantification of circulating HBV RNA (cirB-RNA) is thus a promising biomarker for monitoring antiviral treatment. OBJECTIVES: We evaluated the performance of an automated, prototype quantitative HBV RNA assay for use on the Roche cobas® 6800/8800 systems. STUDY DESIGN: The sensitivity, specificity, linearity, and potential interference by HBV DNA of the cobas® HBV RNA assay were assessed using synthetic HBV armored RNA and clinical specimens. RESULTS: cobas® HBV RNA results were linear between 10 and 107 copies/mL in clinical samples of several HBV genotypes, and up to 109 copies/mL with synthetic RNA. Precision and reproducibility were excellent, with standard deviation below 0.15 log10 copies/mL and coefficients of variation below 5% throughout the linear range. The presence of HBV DNA had minimal (<0.3 log10 copies/mL) impact on HBV RNA quantification at DNA:RNA ratios of up to approximately one million. In a panel of 36 untreated patient samples, cirB-RNA concentrations were approximately 200-fold lower than HBV DNA. cirB-RNA was detected in all 13 HBeAg-positive patients (mean 6.0 log10 copies/mL), and in 20 of 23 HBeAg-negative patients (mean of quantifiable samples 2.2 log10 copies/mL). Finally, cirB-RNA was detected in 12 of 20 nucleoside analog-treated patients (mean of quantifiable samples 3.4 log10 copies/mL). CONCLUSIONS: The cobas® 6800/8800 investigational HBV RNA assay is a high throughput, sensitive and inclusive assay to evaluate the clinical relevance of cirB-RNA quantification in patients with chronic hepatitis B.