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Gene19860101Vol.50issue(1-3)

LACオペレーターのベース置換変異体:in vivoおよびin vitro Affinities for LAC Repressor

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
  • Research Support, U.S. Gov't, P.H.S.
概要
Abstract

16のシングルサイト変異とLAC演算子の1 bp欠失は、リポッレッサーの結合に関してクローン化され、検査されています。天然演算子の13 bpの中央「コア」演算子シーケンス、BP 5-17も合成およびクローン化されました。リプレッサーの親和性は、リプレッサーオペレーター複合体の安定性を測定することにより、染色体オペロンの抑制およびin vitroから生じるベータガラクトシダーゼ活性のレベルを定量化することにより、in vivoで評価されました。我々の結果は、リプレッサーオペレーターの相互作用が特にオペレーターシーケンスの中心全体で非対称であり、位置12で特定の接触をほとんどまたはまったく接触させないという一般的な結論を支持しています。演算子の右側のいくつかのシーケンスの変化は、リプレッサーの親和性を著しく減少させ、シーケンスのこの半分への結合は、左半分よりも重要性が低いことが示唆されていますが、それは依然として結合親和性に大きく寄与しています。

16のシングルサイト変異とLAC演算子の1 bp欠失は、リポッレッサーの結合に関してクローン化され、検査されています。天然演算子の13 bpの中央「コア」演算子シーケンス、BP 5-17も合成およびクローン化されました。リプレッサーの親和性は、リプレッサーオペレーター複合体の安定性を測定することにより、染色体オペロンの抑制およびin vitroから生じるベータガラクトシダーゼ活性のレベルを定量化することにより、in vivoで評価されました。我々の結果は、リプレッサーオペレーターの相互作用が特にオペレーターシーケンスの中心全体で非対称であり、位置12で特定の接触をほとんどまたはまったく接触させないという一般的な結論を支持しています。演算子の右側のいくつかのシーケンスの変化は、リプレッサーの親和性を著しく減少させ、シーケンスのこの半分への結合は、左半分よりも重要性が低いことが示唆されていますが、それは依然として結合親和性に大きく寄与しています。

16 single-site mutations and a 1-bp deletion in the lac operator have been cloned and examined with regard to repressor binding. A 13-bp, central 'core' operator sequence, bp 5-17 of the natural operator, was also synthesized and cloned. Repressor affinity was assessed in vivo by quantitating the level of beta-galactosidase activity resulting from chromosomal operon derepression and in vitro by measuring the stability of repressor-operator complexes. Our results support the general conclusion that the repressor-operator interaction is asymmetric, particularly across the center of the operator sequence, with little or no specific contact at position 12. Some sequence changes in the right side of the operator markedly reduced repressor affinity, indicating that although binding to this half of the sequence has been suggested to be less important than the left half, it still significantly contributes to the binding affinity.

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