妊娠マウスの卵管内腔への組換えAAV含有溶液の直接注射は、着床前胚と卵管上皮の両方のin situ感染を引き起こす

アデノ関連ウイルス（AAV）ベクターは、神経細胞や筋肉を含む多くの種類の細胞や組織で使用される効率的なウイルスベースの遺伝子送達ツールです。AAV血清型6（AAV-6）は、多数のAAV血清型の1つであり、最近、マウスの移植前胚を効率的に伝達することがわかった。さらに、クラスター化された、定期的に散在する短いパリンドロミックリピート（CRISPR）/CRISPR関連タンパク質9（CAS9）システムと結合を介して、最新のゲノム編集技術-AAV-6は、標的軌跡で効果的に変異を生成することが示されています。これは、接合体の分離、in vitroウイルス感染、および感染した胚のレシピエント雌への移植に依存しています。残念ながら、「胚のex vivo処理」と呼ばれるこの手順には、資本、時間、努力のかなりの投資が必要です。妊娠中の雌の卵管腔へのAAV-6の導入による移植前胚の直接伝達は、理想的なアプローチです。この研究では、さまざまな種類の組換えAAVベクター（すなわち、Raav -cag -egfp -1、-2、-5、および-6を注入しました。サイトメガロウイルスエンハンサー +鶏β-アクチンプロモーター）の妊娠0.7日目の妊娠雌マウスの卵管の膨大領域（1細胞後期後期段階に対応）、およびEGFP由来の緑色蛍光がそれぞれの根で評価されました。蛍光の最高レベルは、Raav-cag-egfp-6で観察されました。卵管上皮は明らかに蛍光でした。胚の蛍光は、モルラ段階でピークに達しました。我々の結果は、AAV-6ベクターの卵管内注射が、Zona Pellucidaで密閉された干渉胚をその場で伝達するための最も効果的な方法であることを示しています。AAV-6ベクターは、卵管上皮細胞だけでなく、初期胚の遺伝子操作において有用なツールになる可能性があります。

Adeno-associated virus (AAV) vector is an efficient viral-based gene delivery tool used with many types of cells and tissues, including neuronal cells and muscles. AAV serotype 6 (AAV-6), one of numerous AAV serotypes, was recently found to efficiently transduce mouse preimplantation embryos. Furthermore, through coupling with a clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9) system-a modern genome editing technology-AAV-6 has been shown to effectively create a mutation at a target locus, which relies on isolation of zygotes, in vitro viral infection, and transplantation of the infected embryos to recipient females. Unfortunately, this procedure, termed "ex vivo handling of embryos", requires considerable investment of capital, time, and effort. Direct transduction of preimplantation embryos through the introduction of AAV-6 into the oviductal lumen of pregnant females would be an ideal approach. In this study, we injected various types of recombinant AAV vectors (namely, rAAV-CAG-EGFP-1, -2, -5, and -6, each carrying an enhanced green fluorescent protein [EGFP] cDNA whose expression is under the influence of a cytomegalovirus enhancer + chicken β-actin promoter) into the ampulla region of oviducts in pregnant female mice at Day 0.7 of pregnancy (corresponding to the late 1-cell stage), and EGFP-derived green fluorescence was assessed in the respective morulae. The highest levels of fluorescence were observed in rAAV-CAG-EGFP-6. The oviductal epithelium was distinctly fluorescent. The fluorescence in embryos peaked at the morula stage. Our results indicate that intra-oviductal injection of AAV-6 vectors is the most effective method for transducing zona pellucida-enclosed preimplantation embryos in situ. AAV-6 vectors could be a useful tool in the genetic manipulation of early embryos, as well as oviductal epithelial cells.