成体マウス脊髄のL3からL6領域の運動ニューロンのセクショニングとカウント

組織学は、組織の微視的構造の研究です。このプロトコルにより、腰椎脊髄領域L3からL6の凍結横断切片の生成が可能になります。これにより、マウス腹側角腰椎モーターニューロンを再現可能な方法でカウントすることができます。方法には、脊柱の解剖、油圧押出、および組織学的処理が含まれます。凍結セクションの準備には、最適な切断温度（OCT）培地に腰椎脊髄を埋め込むことが含まれます。組織の正しい方向は、全体的に節約された時間を破棄するために組織の量を計算するために重要です。セクションの厚さと取り付けに関する具体的な詳細について説明します。これらの要件は、特定の領域の最適なカバレッジを許可するだけでなく、個々の運動ニューロンが2回カウントされないことを保証します。運動ニューロンのNISSLボディは、ガロシアニンを使用して染色されました。得られたセクションはすべて同等の領域であり、品質保証は一貫しています。染色の特異性により、科学者は腰部運動ニューロンを特定し、確実に定量化することができます。©2022著者。Wiley Repionicals LLCが発行した現在のプロトコル。基本プロトコル1：マウスの安楽死と脊髄の分離基本プロトコル2：脊髄基本プロトコルの油圧押出3：腰部領域の識別基本プロトコル4：OCT基本プロトコルに埋め込まれたコード：スライド上の凍結切片の収集基本プロトコル6：ガロシアニン染色基本プロトコル7：モーターニューロンカウント。

Histology is the study of the microscopic structure of tissues. This protocol permits the generation of frozen transverse sections of lumbar spinal cord regions L3 to L6. It enables counting of murine ventral horn lumbar motor neurons in a reproducible manner. Methods include spinal column dissection, hydraulic extrusion, and histological processing. The preparation for cryo-sectioning includes embedding lumbar spinal cord in optimal cutting temperature (OCT) medium. The correct orientation of the tissue is critical as calculating the amount of tissue to discard saved time overall. Specific details regarding section thickness and mounting are described. These requirements not only allow optimum coverage of specific regions but also ensure that no individual motor neuron was counted twice. The Nissl bodies of the motor neurons were stained using gallocyanin. The sections obtained are all of a comparable area and quality assurance is consistent. The specificity of the staining enables the scientist to identify and reliably quantify lumbar motor neurons. © 2022 The Authors. Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Euthanasia of mouse and isolation of spinal cord Basic Protocol 2: Hydraulic extrusion of the spinal cord Basic Protocol 3: Identification of the lumbar region Basic Protocol 4: Embedding cord in OCT Basic Protocol 5: Collection of frozen sections onto slides Basic Protocol 6: Gallocyanin staining Basic Protocol 7: Motor neuron counting.