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現在の研究では、マクロファージ偏光の調節におけるMg2+ドープCaso4/β-TCP複合生体高分子の役割と、歯周靭帯幹細胞の骨形成分化の強化との関係を調査しました。さらに、CASO4/β-TCPによるマクロファージ偏光の調節を下回るメカニズムを評価しました。MG2+ドープCASO4/β-TCP複合材は、走査電子顕微鏡（SEM）およびX線回折（XRD）によって特徴付けられました。マクロファージ偏光は、フローサイトメトリー分析を使用して特徴付けられました。マクロファージの形態計測分析は、FITCファロイジン染色によって実施されました。ウエスタンブロットとQRT-PCRアッセイを使用して、それぞれ遺伝子発現レベルとmiRNAを評価しました。CASO4/β-TCPセラミックのSEM形態により、10〜50μMの粒子サイズが明らかになり、XRDスペクトルは、サンプルの特徴的なピークがCASO4およびβ-TCPの特徴と一致することを示しました。フローサイトメトリーの結果は、セラミックバイオポリマーを添加した後のM2マクロファージマーカーの有意なアップレギュレーションを証明し、M2マクロファージへの不活性化M0マクロファージ偏光の誘導を示しています。マクロファージの形態計測分析により、CASO4/β-TCP群の7日目の層状擬似心類の発生が明らかになりました。さらに、フローサイトメトリーにより、90.34％（CD44）および89.36％（CD146）の高い陽性率が明らかになりました。QRT-PCRの結果は、M2マクロファージでmiR-21-5pのレベルが有意に減少したことを示しました。さらに、ウエスタンブロット分析により、Runx2、Osterix（OSX）、およびOsteopontin（OPN）の上方制御された発現レベルが明らかになり、ELISAはサイトカインレベル（IL-1β、IL-10、TGF-β1、およびBMP-2）の増加を示しました。マクロファージの存在、歯周靭帯幹細胞の骨形成分化能力を示しています。この研究では、Mg2+ドープCaso4/β-TCP複合セラミックによるマクロファージ偏光の調節と、LNCRNA PVT1/miR-21-5p/SMAD2分子軸によるその調停が証明されました。
現在の研究では、マクロファージ偏光の調節におけるMg2+ドープCaso4/β-TCP複合生体高分子の役割と、歯周靭帯幹細胞の骨形成分化の強化との関係を調査しました。さらに、CASO4/β-TCPによるマクロファージ偏光の調節を下回るメカニズムを評価しました。MG2+ドープCASO4/β-TCP複合材は、走査電子顕微鏡（SEM）およびX線回折（XRD）によって特徴付けられました。マクロファージ偏光は、フローサイトメトリー分析を使用して特徴付けられました。マクロファージの形態計測分析は、FITCファロイジン染色によって実施されました。ウエスタンブロットとQRT-PCRアッセイを使用して、それぞれ遺伝子発現レベルとmiRNAを評価しました。CASO4/β-TCPセラミックのSEM形態により、10〜50μMの粒子サイズが明らかになり、XRDスペクトルは、サンプルの特徴的なピークがCASO4およびβ-TCPの特徴と一致することを示しました。フローサイトメトリーの結果は、セラミックバイオポリマーを添加した後のM2マクロファージマーカーの有意なアップレギュレーションを証明し、M2マクロファージへの不活性化M0マクロファージ偏光の誘導を示しています。マクロファージの形態計測分析により、CASO4/β-TCP群の7日目の層状擬似心類の発生が明らかになりました。さらに、フローサイトメトリーにより、90.34％（CD44）および89.36％（CD146）の高い陽性率が明らかになりました。QRT-PCRの結果は、M2マクロファージでmiR-21-5pのレベルが有意に減少したことを示しました。さらに、ウエスタンブロット分析により、Runx2、Osterix（OSX）、およびOsteopontin（OPN）の上方制御された発現レベルが明らかになり、ELISAはサイトカインレベル（IL-1β、IL-10、TGF-β1、およびBMP-2）の増加を示しました。マクロファージの存在、歯周靭帯幹細胞の骨形成分化能力を示しています。この研究では、Mg2+ドープCaso4/β-TCP複合セラミックによるマクロファージ偏光の調節と、LNCRNA PVT1/miR-21-5p/SMAD2分子軸によるその調停が証明されました。
In the current study, we explored the role of Mg2+-doped CaSO4/β-TCP composite biopolymer in regulating macrophage polarization and its relation with enhanced osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells. Furthermore, mechanism underling the regulation of macrophage polarization by CaSO4/β-TCP was evaluated. Mg2+-doped CaSO4/β-TCP composite was characterized by scanning electron microscopy (SEM) and X-ray diffraction (XRD). Macrophage polarization was characterized using flow cytometry analysis. Macrophage morphometric analysis was conducted by FITC phalloidin staining. Western blot and qRT-PCR assays were used to assess gene expression levels and miRNAs, respectively. SEM morphology of CaSO4/β-TCP ceramic revealed a particle size of 10-50 μm, and XRD spectrum showed that characteristic peak of samples was consistent with that of CaSO4 and β-TCP. Results from flow cytometry evidenced significant upregulation of M2 macrophage markers after adding ceramic biopolymer, indicating the induction of inactivated M0 macrophage polarization to M2 macrophage. Macrophage morphometric analysis revealed development of lamellar pseudopodia on day 7 in CaSO4/β-TCP group. Furthermore, flow cytometry revealed high positivity rate of 90.34% (CD44) and 89.36% (CD146). qRT-PCR results showed that the level of miR-21-5p was significantly decreased in M2 macrophages. Moreover, western blot analysis revealed upregulated expression levels of RUNX2, osterix (Osx), and osteopontin (OPN), and ELISA exhibited increase in cytokine levels (IL-1β, IL-10, TGF-β1, and BMP-2) in the presence of macrophages, indicating the osteogenic differentiation ability of periodontal ligament stem cells. The study evidenced the regulation of macrophage polarization by Mg2+-doped CaSO4/β-TCP composite ceramic and its mediation through lncRNA PVT1/miR-21-5p/smad2 molecular axis.
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