弱毒化されたアヒル型肝炎ウイルス感染は、M6A修飾を介してアヒルの肝臓での高いmRNA維持に関連しています

宿主の翻訳は、一般に、アヒル肝炎ウイルス（DHAV）感染を含むウイルス感染によって調節されます。以前は、アヒル胚線維芽細胞の細胞モデルにおける細胞タンパク質合成は、DHAV感染によって有意に阻害されるが、ウイルスタンパク質ではなく、翻訳レベルで重要なウイルス宿主相互作用が発生することを示唆していることを報告しました。この研究では、mRNAの安定化や翻訳などのさまざまなRNA生物学的プロセスに不可欠な細胞N6-メチルアデノシン（M6A）修飾に対するDHAV毒性の影響をさらに理解することを目指しています。M6A抗体ベースの免疫沈降、M6A-SEQ、およびLC-MS/MSを使用して、M6A修飾mRNAが毒性および減衰の両方のDHAV感染アヒル肝臓の両方に存在することが観察されました。重要なことに、mRNAのM6Aレベルは、毒性DHAV感染肝臓と比較して減衰したDHAV感染肝臓ではるかに高く、M6A修飾の毒性依存的調節を示唆しています。修正モチーフの分析により、Gaagaagが最も濃縮されたモチーフであることが示されました。M6a-seqとRNA-seqのデータ分析を組み合わせたことは、DHAV感染アヒルの肝臓におけるM6AとmRNAの発現レベルの間に一般的に正の相関があることを示しました。M6Aレベルが低下または増加した遺伝子のGO分析により、これらの遺伝子は酸化還元プロセスや抗ウイルス免疫応答を含むさまざまな用語で濃縮されることが示されました。集合的に、私たちの研究は、アヒルの肝臓におけるM6A修飾とmRNA発現の間のDHAV毒性依存性の調整を明らかにしています。

Host translation is generally modulated by viral infection, including duck hepatitis A virus (DHAV) infection. Previously, we reported that cellular protein synthesis in a cell model of duck embryo fibroblasts is significantly inhibited by DHAV infection but not viral proteins, suggesting that an important viral-host interaction occurs at the translational level. In this study, we aim to further understand the impact of DHAV virulence on cellular N6-methyladenosine (m6A) modification, which is essential to a wide variety of RNA biological processes, such as mRNA stabilization and translation. Using m6A antibody-based immunoprecipitation, m6A-seq, and LC-MS/MS, we observed that m6A-modified mRNA exists in both virulent and attenuated DHAV-infected duckling livers. Importantly, m6A levels in mRNA were much higher in attenuated DHAV-infected livers compared with virulent DHAV-infected livers, suggesting virulence-dependent regulation of m6A modification. Analysis of modification motifs indicated that GAAGAAG is the most enriched motif. Combined m6A-seq and RNA-seq data analysis indicated a generally positive correlation between m6A and mRNA expression levels in DHAV-infected duckling livers. GO analysis of genes with decreased or increased m6A levels showed that these genes were enriched in various terms, including oxidation-reduction processes and antiviral immune responses. Collectively, our work reveals DHAV virulence-dependent coordination between m6A modification and mRNA expression in duckling livers.