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目的：シリコおよび血清学的レベルで、リポポリサッカライドアセンブリタンパク質の組換え細胞外ドメインの抗原性を評価すること - Bartonella bacilliformis（DexR_LPTD）のD（LPTD）。 材料と方法。：シリコ分析を通じて、抗原性および免疫原性の可能性を持つB. bacilliformisタンパク質を選択しました。選択されたタンパク質遺伝子を大腸菌Top10にクローニングし、大腸菌BL21（DE3）プライスで発現しました。組換えタンパク質は、イソプロピル-β-D-1-チオガラクトピラノシド（IPTG）を使用して発現し、誘導条件が最適化されました。最後に、NI-IDA樹脂（HIS60 NIスーパーフロー）で精製し、ウエスタンブロットアッセイを実施しました。 結果：シリコでは、選択されたタンパク質は外膜に位置し、抗原性と免疫原性であるため、LPTDでした。DEXR_LPTD誘導の最適化条件は、0.5 mM IPTG、16時間、TB（素晴らしいスープ）培地、3％（v/v）エタノール、28ºC、OD600：1-1.5および200 rpmでした。精製は小規模で変性条件下で実施され、部分的に精製されたDexR_LPTD2.6μg/mLが得られました。ウエスタンブロットアッセイは、Carrión病患者とDEXR_LPTDの患者からの血清の間に陽性反応を示し、DEXR_LPTDの抗原性を示しています。 結論：DEXR_LPTDは、シリコと血清学レベルの両方での抗原性を示しています。これらの結果は、腐肉疾患に対するワクチン候補に関するさらなる研究の基礎となっています。
目的：シリコおよび血清学的レベルで、リポポリサッカライドアセンブリタンパク質の組換え細胞外ドメインの抗原性を評価すること - Bartonella bacilliformis（DexR_LPTD）のD（LPTD）。 材料と方法。：シリコ分析を通じて、抗原性および免疫原性の可能性を持つB. bacilliformisタンパク質を選択しました。選択されたタンパク質遺伝子を大腸菌Top10にクローニングし、大腸菌BL21（DE3）プライスで発現しました。組換えタンパク質は、イソプロピル-β-D-1-チオガラクトピラノシド（IPTG）を使用して発現し、誘導条件が最適化されました。最後に、NI-IDA樹脂（HIS60 NIスーパーフロー）で精製し、ウエスタンブロットアッセイを実施しました。 結果：シリコでは、選択されたタンパク質は外膜に位置し、抗原性と免疫原性であるため、LPTDでした。DEXR_LPTD誘導の最適化条件は、0.5 mM IPTG、16時間、TB（素晴らしいスープ）培地、3％（v/v）エタノール、28ºC、OD600：1-1.5および200 rpmでした。精製は小規模で変性条件下で実施され、部分的に精製されたDexR_LPTD2.6μg/mLが得られました。ウエスタンブロットアッセイは、Carrión病患者とDEXR_LPTDの患者からの血清の間に陽性反応を示し、DEXR_LPTDの抗原性を示しています。 結論：DEXR_LPTDは、シリコと血清学レベルの両方での抗原性を示しています。これらの結果は、腐肉疾患に対するワクチン候補に関するさらなる研究の基礎となっています。
OBJECTIVE.: To evaluate in silico and at the serological level the antigenic potential of the recombinant extracellular domain of the lipopolysaccharide assembly protein - D (LptD) of Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). MATERIALS AND METHODS.: Through in silico analysis, we selected a B. bacilliformis protein with antigenic and immunogenic potential. The selected protein gene was cloned into Escherichia coli TOP10 and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. Recombinant protein was expressed using isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) and induction conditions were optimized. Finally, it was purified with Ni-IDA resin (His60 Ni Superflow) and a Western Blot assay was conducted. RESULTS.: In silico, the selected protein was LptD because it is located in the outer membrane and is antigenic and immunogenic. Optimized conditions for dexr_LptD induction were 0.5 mM IPTG, 16 hours, TB (Terrific Broth) medium, 3% (v/v) ethanol, 28 ºC, OD600: 1-1.5 and 200 rpm. Purification was carried out under denaturating conditions on a small scale and we obtained 2.6 μg/mL of partially purified dexr_LptD. The Western Blot assay showed a positive reaction between the sera from patients with Carrión's Disease and dexr_LptD, which shows the antigenicity of dexr_LptD. CONCLUSIONS.: The dexr_LptD shows antigenicity both in silico and at the serological level, these results are the basis for further studies on vaccine candidates against Carrion's Disease.
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