真核細胞の原形質膜の傷および修復アッセイ

原形質膜の損傷と膜の完全性の損失は、真核細胞にとって有害です。したがって、細胞が生き残るために効率的な膜修復システムを持っていることが不可欠です。ただし、原形質膜修復の背後にある異なる細胞および分子メカニズムは完全には解明されていません。ここでは、原形質膜の傷、および膜の修復と完全性の測定のための3つの補完的な方法を提示します。最初のプロトコルは、レーザー誘発性損傷に応答した細胞膜修復速度のリアルタイムイメージングに基づいています。2番目と3番目のプロトコルは、ガラスビーズとの渦混合、またはサブリティック濃度のジギトニンによる洗剤誘発性損傷による機械的損傷の後、膜の完全性の集団ベースの尺度を提供するエンドポイントアッセイです。プロトコルは、培養中のほとんどの接着性真核細胞、および懸濁液中の細胞に適用できます。

Damage to the plasma membrane and loss of membrane integrity are detrimental to eukaryotic cells. It is, therefore, essential that cells possess an efficient membrane repair system to survive. However, the different cellular and molecular mechanisms behind plasma membrane repair have not been fully elucidated. Here, we present three complementary methods for plasma membrane wounding, and measurement of membrane repair and integrity. The first protocol is based on real time imaging of cell membrane repair kinetics in response to laser-induced injury. The second and third protocols are end point assays that provide a population-based measure of membrane integrity, after either mechanical injury by vortex mixing with glass beads, or by detergent-induced injury by digitonin in sublytic concentrations. The protocols can be applied to most adherent eukaryotic cells in culture, as well as cells in suspension.