ヒトcal変形骨芽細胞アポトーシスに対する腸球菌faecalis og1rfの効果

背景：腸球菌は、持続性の頂端歯周炎（PAP）を持つ歯の根管における支配的な病原体であり、骨芽細胞アポトーシスは、PAPの不均衡な骨リモデリングに寄与します。ここでは、初代ヒトcal球骨芽細胞のアポトーシスに対するE. faecalis OG1RFの効果を調査しました。具体的には、アポトーシス関連遺伝子の発現と、Bcl-2ファミリーの抗アポトーシスおよび促進剤メンバーの役割を調べました。 方法：感染時点に対応する感染の多様性で、初代ヒトのcal球骨芽細胞をE. faecalis OG1RFとインキュベートしました。フローサイトメトリー、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼDUTPニックエンド標識（TUNEL）アッセイ、カスパーゼ-3/-8/-9活性アッセイ、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）アレイ、および定量的リアルタイムPCRを使用して、骨芽細胞アポトーシスを評価しました。 結果：E。faecalis感染は、初期および後期のアポトーシス細胞およびTUNEL陽性細胞の数を増加させ、ミトコンドリア膜電位（Δψm）を減少させ、カスパーゼ-3/-8/-9経路を活性化しました。さらに、PCRアレイ内の84のアポトーシス関連遺伝子すべてのうち、16の遺伝子の発現が上方制御され、4つの遺伝子の発現が感染した骨芽細胞でダウンレギュレートされました。特に、抗アポトーシスBcl2のmRNA発現はダウンレギュレートされましたが、アポトーシス促進bcl2L11、HRK、BIK、BMF、NOXA、およびBECN1および抗アポトーシスBcl2A1のmRNA発現はアップレギュレートされました。 結論：E。faecalis OG1RF感染は、ヒトcal変形芽球のアポトーシスを引き起こし、Bcl-2ファミリーメンバーは骨芽細胞アポトーシスの調節因子として作用しました。したがって、BCL-2ファミリーメンバーは、持続性の頂端歯周炎の潜在的な治療標的として作用する可能性があります。

BACKGROUND: Enterococcus faecalis is a dominant pathogen in the root canals of teeth with persistent apical periodontitis (PAP), and osteoblast apoptosis contributes to imbalanced bone remodelling in PAP. Here, we investigated the effect of E. faecalis OG1RF on apoptosis in primary human calvarial osteoblasts. Specifically, the expression of apoptosis-related genes and the role of anti-apoptotic and pro-apoptotic members of the BCL-2 family were examined. METHODS: Primary human calvarial osteoblasts were incubated with E. faecalis OG1RF at multiplicities of infection corresponding to infection time points. Flow cytometry, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling (TUNEL) assay, caspase-3/-8/-9 activity assay, polymerase chain reaction (PCR) array, and quantitative real-time PCR were used to assess osteoblast apoptosis. RESULTS: E. faecalis infection increased the number of early- and late-phase apoptotic cells and TUNEL-positive cells, decreased the mitochondrial membrane potential (ΔΨm), and activated the caspase-3/-8/-9 pathway. Moreover, of all 84 apoptosis-related genes in the PCR array, the expression of 16 genes was upregulated and that of four genes was downregulated in the infected osteoblasts. Notably, the mRNA expression of anti-apoptotic BCL2 was downregulated, whereas that of the pro-apoptotic BCL2L11, HRK, BIK, BMF, NOXA, and BECN1 and anti-apoptotic BCL2A1 was upregulated. CONCLUSIONS: E. faecalis OG1RF infection triggered apoptosis in human calvarial osteoblasts, and BCL-2 family members acted as regulators of osteoblast apoptosis. Therefore, BCL-2 family members may act as potential therapeutic targets for persistent apical periodontitis.