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インドールは、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、クローン病、非アルコール性脂肪肝疾患のバイオマーカーとして現在評価されている内因性物質です。タンデム質量分析（LC-MS/MS）と組み合わせた液体クロマトグラフィーを使用した新規、選択的、敏感な方法は、マウス血漿および組織のインドール濃度の定量のために開発されました。サンプルは、氷濃度のアセトニトリル（ACN）を使用したタンパク質沈殿によって調製され、その後抽出された分析物をLC-MS/MSシステムに注入しました。インドールは、移動相0.1％水酸（A）およびメタノール（B）を備えたsynergi融合C18（4 µM、250×2.0 mm）カラムを使用して分離し、実行時間12分の勾配流を使用してメタノール（B）を分離しました。質量分析計は、インドールおよび124.15> 96.1 m/zの118.1> 91.1 m/zの前駆体イオン>産物イオンの組み合わせを使用して、複数の反応モニタリング（MRM）モードで単位分解能での大気圧力化学イオン化（APCI）陽性モードで動作しました。内部標準（IS）インドールD7。MS/MS応答は、インドール濃度（1〜500 ng/ml）の範囲で線形でした。検証済みの方法は、マウス肺（4.3〜69.4 ng/g）、血清（0.8-38.7 ng/ml）および盲腸（1043.8-12,124.4 ng/g）のインドール濃度範囲の定量に適用されました。この方法は、バイオマーカーとしてのインドールの役割を調査し、異なる疾患状態におけるその意味を理解するのに役立ちます。
インドールは、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、クローン病、非アルコール性脂肪肝疾患のバイオマーカーとして現在評価されている内因性物質です。タンデム質量分析（LC-MS/MS）と組み合わせた液体クロマトグラフィーを使用した新規、選択的、敏感な方法は、マウス血漿および組織のインドール濃度の定量のために開発されました。サンプルは、氷濃度のアセトニトリル（ACN）を使用したタンパク質沈殿によって調製され、その後抽出された分析物をLC-MS/MSシステムに注入しました。インドールは、移動相0.1％水酸（A）およびメタノール（B）を備えたsynergi融合C18（4 µM、250×2.0 mm）カラムを使用して分離し、実行時間12分の勾配流を使用してメタノール（B）を分離しました。質量分析計は、インドールおよび124.15> 96.1 m/zの118.1> 91.1 m/zの前駆体イオン>産物イオンの組み合わせを使用して、複数の反応モニタリング（MRM）モードで単位分解能での大気圧力化学イオン化（APCI）陽性モードで動作しました。内部標準（IS）インドールD7。MS/MS応答は、インドール濃度（1〜500 ng/ml）の範囲で線形でした。検証済みの方法は、マウス肺（4.3〜69.4 ng/g）、血清（0.8-38.7 ng/ml）および盲腸（1043.8-12,124.4 ng/g）のインドール濃度範囲の定量に適用されました。この方法は、バイオマーカーとしてのインドールの役割を調査し、異なる疾患状態におけるその意味を理解するのに役立ちます。
Indole is an endogenous substance currently being evaluated as a biomarker for ulcerative colitis, irritable bowel syndrome, Crohn’s disease and non-alcoholic fatty liver disease. A novel, selective, and sensitive method using liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was developed for quantitation of indole concentrations in mouse plasma and tissues. Samples were prepared by protein precipitation using ice-cold acetonitrile (ACN) followed by injecting the extracted analyte to LC-MS/MS system. Indole was separated using Synergi Fusion C18 (4 µm, 250 × 2.0 mm) column with mobile phase 0.1% aqueous formic acid (A) and methanol (B) using gradient flow with run time 12 min. The mass spectrometer was operated in atmospheric pressure chemical ionization (APCI) positive mode at unit resolution in multiple reaction monitoring (MRM) mode, using precursor ion > product ion combinations of 118.1 > 91.1 m/z for indole and 124.15 > 96.1 m/z for internal standard (IS) indole d7. The MS/MS response was linear over the range of indole concentrations (1−500 ng/mL). The validated method was applied for quantitation of indole concentrations range in mouse lungs (4.3−69.4 ng/g), serum (0.8−38.7 ng/mL) and cecum (1043.8−12,124.4 ng/g). This method would help investigate the role of indole as a biomarker and understand its implications in different disease states.
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