T細胞のウイルス形質導入のための乾燥した大型アルギン酸足場の製造と使用

CAR-T細胞療法のためのT細胞の遺伝子工学は、ここ数年で癌治療の最前線に到達しました。Car-T細胞は、ウイルス遺伝子移動によりT細胞への産生されます。現在のウイルス遺伝子導入のゴールドスタンダードには、レトロネクチンでコーティングされたプレートのスピン凝集が含まれますが、これは高価で時間がかかります。CAR-T細胞を生成するための効率的で費用対効果の高い方法が非常に必要です。ここで説明するのは、活性化されたT細胞のウイルス導入を効率的に促進するドライダックス足場として知られる、安価で乾燥したマクロロ酸アルギン酸足場を製造する方法です。足場は、ウイルスを播種したレトロネクチンでコーティングされたプレートのゴールドスタンダードスピノーキュレーションの代わりに使用され、細胞を伝達するプロセスを簡素化するように設計されています。アルギン酸塩をカルシウム-D-グルコン酸塩と架橋し、一晩凍結して足場を作り出します。凍結した足場を凍結乾燥剤で72時間凍結乾燥させて、乾燥した大型の足場の形成を完了します。足場は、ウイルスと活性化されたT細胞を足場の上に一緒に播種して、遺伝子組み換え細胞を産生すると、ウイルス遺伝子移動を媒介します。足場は、85％を超える一次T細胞変換を生成します。これは、レトロネクチンコーティングプレート上のスピノキュレーションの形質導入効率に匹敵します。これらの結果は、乾燥したマクロロ酸アルギン酸足場が、従来の形質導入法に代わるより安価で便利な代替として機能することを示しています。

Genetic engineering of T cells for CAR-T cell therapy has come to the forefront of cancer treatment over the last few years. CAR-T cells are produced by viral gene transfer into T cells. The current gold standard of viral gene transfer involves spinoculation of retronectin-coated plates, which is expensive and time-consuming. There is a significant need for efficient and cost-effective methods to generate CAR-T cells. Described here is a method for fabricating inexpensive, dry macroporous alginate scaffolds, known as Drydux scaffolds, that efficiently promote viral transduction of activated T cells. The scaffolds are designed to be used in place of gold standard spinoculation of retronectin-coated plates seeded with virus and simplify the process for transducing cells. Alginate is cross-linked with calcium-D-gluconate and frozen overnight to create the scaffolds. The frozen scaffolds are freeze-dried in a lyophilizer for 72 h to complete the formation of the dry macroporous scaffolds. The scaffolds mediate viral gene transfer when virus and activated T cells are seeded together on top of the scaffold to produce genetically modified cells. The scaffolds produce >85% primary T cell transduction, which is comparable to the transduction efficiency of spinoculation on retronectin-coated plates. These results demonstrate that dry macroporous alginate scaffolds serve as a cheaper and more convenient alternative to the conventional transduction method.