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Snake Venomは、命を救う薬理学的可能性のため、多数の治療用製剤にとって貴重な原料です。ただし、価格が高いため、偽の「ヘビ毒」はグローバル市場の大部分を獲得しており、現在、偽物とオリジナルを迅速に区別できる信頼できる報告DNAベースの方法はありません。したがって、この研究では、シンプレックスポリメラーゼ連鎖反応分析のみで市販の毒結晶のヘビの起源を検出するために、ミトコンドリアDループフラグメントを標的とする新たに設計されたヘビ固有のユニバーサルプライマーのセットを採用しました。最適なサーマルサイクリング条件下では、純粋な背景と混合背景からの145-149 bpのヘビ特異的ミトコンドリアDループフラグメントのみが、新しく設計されたプライマーによって増幅されました。特異性は、9つの異なるヘビの個々のDNA増幅によるDNA混合物と普遍性のDNA混合物にDNA増幅が発生しなかったことを確認することで達成されました。10.0μL反応で合計10〜2 ngに含まれる最小ミトコンドリアDNAを効率的に増幅したプライマーも、市販のコブラ毒結晶のヘビの起源を検出することができました。これらの発見は、新しく設計されたプライマーを使用して、ヘビ特異的ミトコンドリアDループフラグメントを増幅することにより、ヘビ毒venベースの薬の最高水準を達成するために、オリジナルおよび偽の市販のヘビ毒結晶を区別できることを示唆しています。
Snake Venomは、命を救う薬理学的可能性のため、多数の治療用製剤にとって貴重な原料です。ただし、価格が高いため、偽の「ヘビ毒」はグローバル市場の大部分を獲得しており、現在、偽物とオリジナルを迅速に区別できる信頼できる報告DNAベースの方法はありません。したがって、この研究では、シンプレックスポリメラーゼ連鎖反応分析のみで市販の毒結晶のヘビの起源を検出するために、ミトコンドリアDループフラグメントを標的とする新たに設計されたヘビ固有のユニバーサルプライマーのセットを採用しました。最適なサーマルサイクリング条件下では、純粋な背景と混合背景からの145-149 bpのヘビ特異的ミトコンドリアDループフラグメントのみが、新しく設計されたプライマーによって増幅されました。特異性は、9つの異なるヘビの個々のDNA増幅によるDNA混合物と普遍性のDNA混合物にDNA増幅が発生しなかったことを確認することで達成されました。10.0μL反応で合計10〜2 ngに含まれる最小ミトコンドリアDNAを効率的に増幅したプライマーも、市販のコブラ毒結晶のヘビの起源を検出することができました。これらの発見は、新しく設計されたプライマーを使用して、ヘビ特異的ミトコンドリアDループフラグメントを増幅することにより、ヘビ毒venベースの薬の最高水準を達成するために、オリジナルおよび偽の市販のヘビ毒結晶を区別できることを示唆しています。
Snake venom is a valuable raw material for numerous therapeutic formulations because of its life-saving pharmacological potential. However, due to their high price, fake "snake venoms" have captured a significant portion of the global market, and there is currently no reliable reported DNA-based method available for quickly distinguishing between fakes and originals. Therefore, in this study, a set of newly designed snake-specific universal primers targeting mitochondrial D-loop fragments were employed to detect snake origins in commercial venom crystals by only simplex polymerase chain reaction analysis. Under the optimal thermal cycling conditions, only the 145-149 bp snake-specific mitochondrial D-loop fragments from pure and mixed backgrounds were amplified by the newly designed primers. Specificity was achieved by confirming no DNA amplification occurred in the DNA admixture of ten different chordates, and universality by individual DNA amplification of nine different snakes. The primers that efficiently amplified the minimum mitochondrial DNA contained in a total of 10-2 ng in a 10.0 μl reaction were also successfully able to detect the snake origin in commercial cobra venom crystals. These findings suggest that the newly designed primers can be used to differentiate the original and fake commercial snake venom crystals in order to achieve the highest standards of snake venom-based medications through amplifying the snake-specific mitochondrial D-loop fragments.
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