中国南東部のパントエアアナナティスによって引き起こされたスイートコーンの細菌葉の縞の最初の報告

スイートコーン（Zea MaysConvar。Saccharatavar。Rugosa）は、中国南東部で人気のある野菜作物です。2018年から2021年の春の季節に、広州州広州の野原でスイートコーン種類のYuetian28で細菌の葉の縞模様の深刻な発生が観察されました。疾患の発生率は50％〜70％でした。感染した葉は、最初はV5-V6段階の静脈と平行に長くてクロロ酸縞を示し、その後、白または茶色になり、疾患の発生の過程で乾燥しました。重度の感染症では、葉病変が合体して大きな不規則な枯病領域を形成しました（図S1A）。この病気を調査するために、表面滅菌後に4つの植物から感染した葉の0.5 cm2サンプルを収集し、滅菌蒸留水で3回すすいだ。すべての葉のサンプルを栄養寒天（NA）培地に配置し、28°で48時間インキュベートしました。明るい黄色のコロニーがサンプルの端の近くで観察されました。私たちは植民地を選び、純粋な文化を得るために3回NA媒体に再縞模様を付けました。4つの分離株、GZ2201、GZ2202、GZ2203、およびGZ2204が、さらなる研究のために選択されました。すべての分離株はグラム陰性棒であり、オキシダーゼ、ウレアーゼ、硝酸還元酵素反応、およびゼラチン液化について陰性でした。それらは、カタラーゼ、クエン酸塩の利用、インドール生産、およびVoges-Proskauerテストに陽性でした。以前に報告されたプライマー（Brady etal。2008）を使用して16S RDNA、RPOB、LEUS、およびGYRBシーケンスを配列決定し、GenBankにシーケンスを堆積しました（ON740665からON740668から16S RDNAのON740668からRPOB; On755171からOn755171Leus;およびop227136からop227139からgyrbの場合）。シーケンスは、Pantoea Ananatis型株LMG2665（Genbank JFZU01）のシーケンスと98％のアイデンティティを共有しています。Gyrb、Leus、およびRpoBの連結配列の系統解析により、4つの分離株がP. ananatisで群がっていることが示されました（図S2）。スイートコーン品種のYuetian28のP. ananatisの分離株の病原性をテストするために、細菌懸濁液（108 cfu/ml）（Kini etal。2020）または滅菌蒸留水のシリンジ浸潤（108 cfu/ml）または滅菌蒸留水のシリンジ浸潤により植物を接種しました。ネガティブコントロール。接種された植物は、28°、60％の相対湿度、16-H/8時間の光暗いサイクルの成長チャンバーに配置されました。7日間のインキュベーションの後、接種された植物で発生した元の症状に似たクロロチック筋（図S1D）は、対照植物は症状のないままでした（図S1C）。接種された植物から細菌を再分離し、16S RDNA、RPOB、Leus、およびGYRBのシーケンスによりアイデンティティを確認しました。P. ananatisは以前、アルゼンチン、エクアドル、中国で栽培されたトウモロコシの葉の斑点疾患を引き起こすと報告されていました（Alippi etal。2010; Toaza etal。2021; Cui etal。2022）。私たちの知る限り、これは中国南東部のスイートコーンで葉の縞を引き起こすP. ananatisの最初の報告です。病気の広がりを制御するのに役立つためには、P。nanatis管理に関するさらなる研究が必要です。

Sweet corn (Zea mays convar. saccharata var. rugosa) is a popular vegetable crop in southeast China. During the spring seasons of 2018-2021, a serious outbreak of bacterial leaf streak was observed in sweet corn variety Yuetian28 in the field in Guangzhou, Guangdong Province. The disease incidence was 50%-70%. Infected leaves initially displayed long, chlorotic streaks parallel to veins at the V5-V6 stage, and then turned white or brown and dried out over the course of disease development. In severe infections, leaf lesion coalesced to form large irregular blight areas (Fig. S1A). To investigate this disease, we collected 0.5 cm2 samples of infected leaves from four plants after surface sterilization and rinsed them three times with sterile distilled water. We placed all leaf samples on nutrient agar (NA) medium and incubated them at 28℃ for 48 hours. Bright-yellowish colonies were observed near the edges of the samples. We picked the colonies and re-streaked them onto NA medium three times to obtain pure cultures. Four isolates, GZ2201, GZ2202, GZ2203, and GZ2204, were selected for further study. All isolates were gram-negative rods and were negative for oxidase, urease, nitrate reductase reactions, and gelatin liquefaction. They were positive for catalase, citrate utilization, indole production, and the Voges-Proskauer test. We sequenced the 16S rDNA, rpoB, leuS, and gyrB sequences using previously reported primers (Brady et al. 2008) and deposited the sequences in GenBank (accession nos. ON740665 to ON740668 for 16S rDNA; ON755167 to ON755170 for rpoB; ON755171 to ON755174 for leuS; and OP227136 to OP227139 for gyrB). The sequences share >98% identity with sequences from Pantoea ananatis type strain LMG2665 (GenBank JFZU01) indicating that the causal pathogen of bacteria leaf streak of sweet corn is P. ananatis (Fig. S1B). Phylogenetic analysis of gyrB, leuS, and rpoB concatenated sequence showed that the four isolates clustered with P. ananatis (Fig S2). To test the pathogenicity of the isolates of P. ananatis on the sweet corn variety Yuetian28, we inoculated plants at the V3 stage by syringe infiltration of bacterial suspension (108 CFU/ml) (Kini et al. 2020) or sterile distilled water as a negative control. Inoculated plants were placed in a growth chamber at 28 ℃, 60% relative humidity, 16-h/8-h light-dark cycle. After 7 days of incubation, chlorotic streaks resembling the original symptoms developed on inoculated plants (Fig. S1D), while control plants remained symptomless (Fig. S1C). We successfully re-isolated bacteria from the inoculated plants and confirmed their identity by sequencing of 16S rDNA, rpoB, leuS, and gyrB. P. ananatis was previously reported to cause leaf spot disease in maize grown in Argentina, Ecuador, and China (Alippi et al. 2010; Toaza et al. 2021; Cui et al. 2022). To our knowledge, this is the first report of P. ananatis causing leaf streak in sweet corn in southeast China. Further research on P. ananatis management is needed to help control disease spread.