A549肺癌細胞の生存の調節におけるIGFBP-3とヘパラーゼの反対の役割

この研究では、A549およびH1299非小細胞肺癌（NSCLC）生存の調節におけるヘパラナーゼとIGFBP-3の役割を調べました。IGFBP-3の発現のないp53-nullであることが知られているH1299細胞は、A549細胞の培地と比較して、培地でより高いヘパラナーゼレベルと活性、およびより高いレベルのヘパラン硫酸（HS）を有することがわかりました。ヘパラナーゼ活性またはsiRNAを使用したその発現を阻害することは、A549細胞の培地でIGFBP-3のレベルに影響を与えず、可溶性HSフラグメントのレベルを低下させ、培地のIGFBP-3とHSの間の相互作用の減少につながりました。HSは、IGFBP-3またはIGFBP-3ペプチドに結合するためにHAと競合しましたが、変異ペプチド（K228AR230A）ではありませんでした。HSは、IGFBP-3の細胞毒性効果を廃止しましたが、抗CD44抗体（5F12）でHA-CD44シグナル伝達をブロックすることでは廃止されませんでした。Blocking HA-CD44シグナル伝達は、A549およびH1299の両方の細胞株の両方の培地でヘパラナーゼのレベルを低下させ、P53活性とA549細胞媒体のIGFBP-3のレベルを増加させました。P53のノックダウンにより、A549細胞媒体のヘパラナーゼレベルが増加し、IGFBP-3レベルが低下し、A549細胞のIGFBP-3のノックダウンがp53活性をブロックし、培地でヘパラナーゼレベルを増加させました。

In this study, we examined the roles of heparanase and IGFBP-3 in regulating A549 and H1299 non-small-cell lung cancer (NSCLC) survival. We found that H1299 cells, known to be p53-null with no expression of IGFBP-3, had higher heparanase levels and activity and higher levels of heparan sulfate (HS) in the media compared to the media of A549 cells. Inhibiting heparanase activity or its expression using siRNA had no effect on the levels of IGFBP-3 in the media of A549 cells, reduced the levels of soluble HS fragments, and led to decreased interactions between IGFBP-3 and HS in the media. HS competed with HA for binding to IGFBP-3 or IGFBP-3 peptide (215-KKGFYKKKQCRPSKGRKR-232) but not the mutant peptide (K228AR230A). HS abolished the cytotoxic effects of IGFBP-3 but not upon blocking HA-CD44 signaling with the anti-CD44 antibody (5F12). Blocking HA-CD44 signaling decreased the levels of heparanase in the media of both A549 and H1299 cell lines and increased p53 activity and the levels of IGFBP-3 in A549 cell media. Knockdown of p53 led to increased heparanase levels and reduced IGFBP-3 levels in A549 cell media while knockdown of IGFBP-3 in A549 cells blocked p53 activity and increased heparanase levels in the media.