Denileukin diftitoxとそのラット血清中のその抗薬物抗体の定量化のための電気化学的微量アッセイ

ジフテリア毒素（DT）とインターロイキン-2（IL2）の断片を含むデニレキンディフティトックス（DD）は、リンパ腫の治療のために開発され、日本でのマーケティングで承認されています。前臨床動物における薬物動態および免疫原性を含む毒物学的評価は、薬物開発にとって重要であるため、DDおよび抗薬物抗体（ADA）のアッセイは、電気化学的微量（ECL）検出によって開発されました。DDアッセイでは、ルテニウム標識抗DT ABおよびビオチン化抗IL2 ABを血清サンプルと混合し、混合物をECL検出のためにストレプトアビジンコーティングウェルによって捕獲しました。ADAアッセイでは、ストレプトアビジンプレートに結合したビオチン化DD、ルテニウム標識DD、およびADAの免疫複合体のシグナルを決定しました。DDは10 ng/mLから定量化可能でした。品質管理サンプルの精度と精度はそれぞれ±20％と20％以内であり、ラット血清中のDDの安定性は正常に評価されました。ADAの陽性対照サンプルの精度は、スクリーニングおよび確認アッセイでのADA検出の承認基準とカットポイント値の範囲内であり、統計分析によって決定されました。薬物誘発ADAは、スクリーニングアッセイに続いて確認アッセイで検出されました。開発された方法は、薬物動態と免疫原性を評価して、ラットの毒性研究をサポートするために成功裏に適用されました。

Denileukin Diftitox (DD), comprising fragments of diphtheria toxin (DT) and interleukin-2 (IL2), was developed for the treatment of lymphoma and has been approved for marketing in Japan. Toxicological evaluation including pharmacokinetics and immunogenicity in preclinical animals is important for drug development and thus the assays of DD and anti-drug antibody (ADA) were developed by electrochemiluminescence (ECL) detection. For the DD assay, ruthenium-labeled anti-DT Ab and biotinylated anti-IL2 Ab were mixed with serum samples and the mixture was captured by streptavidin-coated wells for ECL detection. For the ADA assay, signals of immuno-complex of biotinylated DD, ruthenium-labeled DD, and ADA, bound to streptavidin plate were determined. DD was quantifiable from 10 ng/mL. Accuracy and precision of quality control samples were within ±20% and 20%, respectively, and stability of DD in rat serum was successfully assessed. Precision of positive control samples of ADA was within the acceptance criteria and cut point values for ADA detection in the screening and confirmatory assay were determined by statistical analysis. Drug-induced ADA was detected by screening assay followed by confirmatory assay. The developed method was successfully applied to assess pharmacokinetics and immunogenicity to support toxicity studies in rats.