タンパク質チロシンキナーゼAxlおよびFynの薬理学的阻害は、in vitroでTNF-α誘発内皮炎症性活性化を減少させます

主要な手術は、内皮細胞の炎症誘発性活性化につながる全身性炎症を誘発します。内皮炎症は、急性腎障害腫瘍壊死因子アルファ（TNF-α）を含む術後臓器損傷のドライバーの1つであり、内皮細胞の手術誘発性炎症誘発性活性化の重要な成分です。シグナル伝達カスケードのバックボーンであるキナーゼは、薬理学的阻害によって標的にされる可能性があります。これは、過剰な内皮炎症を妨げるための有望な治療オプションです。この研究では、活性化キナーゼを潜在的な治療標的として特定しました。これらの標的は、内皮細胞におけるTNF-α誘発性炎症誘発性シグナル伝達を減少させるために薬理学的に阻害されました。PAMCHIPアレイを使用したキノムプロファイリングは、64個のタンパク質チロシンキナーゼと88個のセリン - スレオニンキナーゼを特定しました。この活性は、in vitroのヒト臍静脈内皮細胞における10 ng/mL TNF-αの刺激によるさまざまなタイムポイント（5〜240分）で測定されました。。PTKS AXLとFYNは、高いキナーゼ活性プロファイルに基づいて選択されました。内皮特異的タンパク質CD31との共局在実験では、コントロールおよびTNF-αに曝露したマウスの両方の細動脈および糸球体の糸球体およびFYNの内皮細胞におけるAXL発現を示しました。Axl阻害剤BMS-777607およびFyn阻害剤PP2による薬理学的阻害は、MRNAおよびVCAM-1でのE-セレクチン、VCAM-1、ICAM-1、IL-6およびIL-8のTNF-α誘発性炎症誘発性活性化を有意に減少させました。in vitroでHuvecのタンパク質レベルでのICAM-1、およびIL-6。各阻害剤による薬理学的阻害により、HUVECへの白血球の接着も大幅に減少しましたが、それはわずかな程度まで減少しました。結論として、キナーゼ阻害剤BMS-777607およびPP2による内皮細胞の前処理は、in vitroでTNF-α誘発内皮炎症を減少させます。

Major surgery induces systemic inflammation leading to pro-inflammatory activation of endothelial cells. Endothelial inflammation is one of the drivers of postoperative organ damage, including acute kidney injury Tumour Necrosis Factor alpha (TNF-α) is an important component of surgery-induced pro-inflammatory activation of endothelial cells. Kinases, the backbone of signalling cascades, can be targeted by pharmacological inhibition. This is a promising treatment option to interfere with excessive endothelial inflammation. In this study, we identified activated kinases as potential therapeutic targets. These targets were pharmacologically inhibited to reduce TNF-α-induced pro-inflammatory signalling in endothelial cells. Kinome profiling using PamChip arrays identified 64 protein tyrosine kinases and 88 serine-threonine kinases, the activity of which was determined at various timepoints (5-240 min) following stimulation with 10 ng/ml TNF-α in Human umbilical vein endothelial cells in vitro. The PTKs Axl and Fyn were selected based on high kinase activity profiles. Co-localisation experiments with the endothelial-specific protein CD31 showed Axl expression in endothelial cells of glomeruli and Fyn in arterioles and glomeruli of both control and TNF-α-exposed mice. Pharmacological inhibition with Axl inhibitor BMS-777607 and Fyn inhibitor PP2 significantly reduced TNF-α-induced pro-inflammatory activation of E-selectin, VCAM-1, ICAM-1, IL-6 and IL-8 at mRNA and VCAM-1, ICAM-1, and IL-6 at protein level in HUVEC in vitro. Upon pharmacological inhibition with each inhibitor, leukocyte adhesion to HUVEC was also significantly reduced, however to a minor extent. In conclusion, pre-treatment of endothelial cells with kinase inhibitors BMS-777607 and PP2 reduces TNF-α-induced endothelial inflammation in vitro.