グルタチオンとのレンズクリスタリンの混合ジスルフィド形成に関する分光研究

混合ジスルフィドは、レンズクリスタリンと酸化グルタチオン（GSSG）とチオールジスルフィド交換反応を通じて形成されました。反応は、等電気焦点（IEF）およびDTNB [5,5'-ジチオビス（2-ニトロベンゾ酸）]アッセイによって監視されました。タンパク質の立体構造への影響は、循環二色性（CD）と蛍光によって研究されました。DTNBは、それぞれα-クリスタリンとガンマクリスタリンでの交換反応後、SHグループの22％および49％の減少を示しています。交換反応は、IEFパターンでの酸性シフトによってさらに示されました。近くの紫外線CDは、GSSG処理のクリスタリンのわずかな減少を示しています。SH特異的プローブIANBD、4-（N-ヨードアセトキシ）エチル-N-メチルアミノ-7-ニトロベンズ-1,3-ジアゾールの蛍光測定は、表面SH基がGSSG治療で酸化されていることを示しています。サンプル。アミン選択的反応性プローブFITC、フルオレセイン-5-イソチオシアネートを使用した標識は、混合ジスルフィド形成とのアミン反応性の増加を示しています。偏光測定は、結合したFITCプローブが混合ジスルフィドリッチクリスタリンの剛性の低い構造にあることを示しています。これらの結果はすべて、混合ジスルフィドの形成がタンパク質を部分的に展開することを指摘しています。

Mixed disulfide was formed through thiol-disulfide exchange reaction of lens crystallin with oxidized glutathione (GSSG). The reaction was monitored by isoelectric focusing (IEF) and DTNB [5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)] assay. The effects on protein conformation were studied by circular dichroism (CD) and fluorescence. The DTNB shows 22% and 49% decrease of SH groups after the exchange reaction in alpha-crystallin and gamma-crystallin, respectively. The exchange reaction was further shown by an acidic shifting in IEF pattern. The near ultraviolet CD shows a slight decrease in the GSSG-treated crystallins. The fluorescence measurements of the SH specific probe IANBD, 4-(N-iodoacetoxy)ethyl-N-methylamino-7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole, indicate that the surface SH groups were oxidized in the GSSG-treated samples. The labeling with amine selectively reactive probe FITC, fluorescein-5-isothiocyanate, indicates an increase of amine reactivity with mixed disulfide formation. Polarization measurements show that bound FITC probes are in a less rigid structure in the mixed disulfide rich crystallin. All these results point out that the formation of mixed disulfide partially unfolds protein.