レスベラトロールは、miR-181a-5p発現を増加させることにより、破骨細胞前駆体Raw 2647細胞のリポ多糖を介した活性化を抑制します。

レスベラトロール（RES）には、抗炎症および抗耐性症機能があります。リポ多糖（LPS）によって刺激された破骨細胞前駆体RAW 264.7細胞から炎症性サイトカインを放出することにより、破骨細胞分化に対するRESの効果を評価しました。この研究では、LPS（1 ng/L）を使用して、in vitroで生の264.7炎症性損傷モデルを誘導しました。合計25 ng/ml M-CSF + 30 ng/ml RANKLまたはプラス1μg/L LPSを使用して、実験で破骨細胞形成を誘導しました。Cell Counting Kit-8アッセイを利用して、RAW 264.7細胞の相対的な細胞生存を測定しました。次に、酵素結合免疫吸着アッセイを利用して、インターロイキン-1ベータ（IL-1β）、腫瘍壊死因子α（TNF-α）、IL-6などの炎症マーカーの豊富さを測定しました。その後、ウエスタンブロット分析を適用して、リン酸化転換成長因子ベータ活性化キナーゼ1（P-TAK1）タンパク質、TNF受容体関連因子6（TRAF6）、核因子κBκB阻害剤タンパク質（IκB）、リン酸化IκBの存在量を評価しました。-α（P-IκB-α）、および核因子κB65（NF-κB65）。miR-181a-5p、TRAF6、特異的遺伝子カルシトニン受容体（CTR）、活性化T核因子1（NFATC1）、カテプシンK（CTSK）、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）-9のmRNA発現レベルは、リアルタイムを介して決定されました。ポリメラーゼ連鎖反応。破骨細胞骨吸収機能が決定されました。最後に、タルテル酸塩耐性酸ホスファターゼ（TRAP）染色が実行されました。結果は、モデルグループと比較して、上清炎症性因子TNF-α、IL-1β、およびIL-6の発現の程度がREで実質的に減衰したことを発見しました。治療グループ（P <0.05）。さらに、生の264.7細胞におけるmiR-181a-5p発現の程度は有意に増加したが、P-IκB-α、P-TAK1、NF-κB65、およびTRAF6発現は、モデルグループではなくRES治療群で有意に減少した（p <0.05）。CTR、NFATC1、MMP-9、CTSK、およびTRAP mRNA発現レベルは、RES治療群の破骨細胞分化と骨吸収中に大幅に減少しました。結果は、RESが生殖器への生の264.7細胞分化を減少させ、LPS刺激を緩和できることを示唆しています。骨粗鬆症、および基礎となるメカニズムは、miR-181a-5p発現の増加を介したTRAF6/TAK1経路のRES阻害活性と関連している可能性があります。

Resveratrol (Res) has anti-inflammation and antiosteoporosis functions. We evaluated the effect of Res on osteoclast differentiation by releasing inflammatory cytokines from osteoclast precursor RAW 264.7 cells stimulated by lipopolysaccharide (LPS). In the study, LPS (1 ng/L) was used to induce the Raw 264.7 inflammatory injury model in vitro. A total of 25 ng/mL M-CSF + 30 ng/mL RANKL or plus 1 μg/L LPS was used to induce osteoclastogenesis in the experiments. We utilized the Cell Counting Kit-8 assay to measure the relative cell survival of RAW 264.7 cells. Then, enzyme-linked immunosorbent assays were utilized to measure the abundance of inflammatory markers, such as interleukin-1 beta (IL-1β), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and IL-6. Subsequently, Western blot analysis was applied to assess the abundance of phosphorylated transforming growth factor beta-activated kinase 1 (P-TAK1) protein, TNF receptor-associated factor 6 (TRAF6), nuclear factor-κB inhibitor protein (IκB), phosphorylated IκB-α (P-IκB-α), and nuclear factor κB65 (NF-κB65). mRNA expression levels of miR-181a-5p, TRAF6, specific gene calcitonin receptor (CTR), activated T nuclear factor 1 (NFATC1), cathepsin K (CTSK), and matrix metalloproteinase (MMP)-9 were determined via a real-time polymerase chain reaction. Osteoclast bone resorption function was determined. Finally, tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining was performed.The results found that Compared with the model group, the degrees of expressions of supernatant inflammatory factors TNF-α, IL-1β, and IL-6 were substantially attenuated in the Res treatment group (p < 0.05). Furthermore, the extent of miR-181a-5p expression in the RAW 264.7 cells significantly increased, whereas P-IκB-α, P-TAK1, NF-κB65, and TRAF6 expressions significantly decreased in the Res treatment group as opposed to the model group (p < 0.05). The CTR, NFATC1, MMP-9, CTSK, and TRAP mRNA expression levels were substantially reduced during osteoclast differentiation and bone resorption in the Res treatment group.The results suggest that Res can reduce the RAW 264.7 cell differentiation into osteoclasts and relieve LPS-stimulated osteoporosis, and the underlying mechanism may be associated with the Res-inhibited activity of the TRAF6/TAK1 pathway through the increased miR-181a-5p expression.