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モルモットリポタンパクリパーゼのコーディング配列全体と短い隣接領域をカバーするcDNAクローンを分離および配列決定しました。使用された発現cDNAライブラリーは、脂肪細胞に由来するmRNAを使用してLambda GT11で構築されました。推定されたアミノ酸（AA）配列は、リーダーペプチドとして解釈される17 AAのストレッチから始まります。オープンリーディングフレームは448 AA残基で続き、TGAストップコドンで終了します。以前のデータと組み合わせて、この情報により、リパーゼ分子内のドメインの割り当てが可能になります。ヘパリン結合部位の可能性のある候補は、アポリポタンパク質EおよびBの受容体結合部位のコンセンサスシーケンスに類似した5つの正電荷を含む9-AAストレッチです。いくつかの組織からのポリアデニル化RNAの分析は、脂肪細胞、心筋、乳腺における高レベルの発現を示しています。肝臓でリポタンパク質リパーゼmRNAを検出することはできませんでした。ノーザンブロットは、それぞれ3.8 kb、3.3 kb、および2.1 kbに対応するサイズの3つの主要なmRNAを明らかにしました。脂肪細胞と心筋では、推定サイズが4.5 kbの4番目のmRNAも検出されました。サザンブロッティングによるゲノムDNAの分析により、リポタンパク質リパーゼをコードする単一の遺伝子遺伝子座が示されました。したがって、主要な転写産物の修正は、さまざまなmRNAの生産に関与しているようです。
モルモットリポタンパクリパーゼのコーディング配列全体と短い隣接領域をカバーするcDNAクローンを分離および配列決定しました。使用された発現cDNAライブラリーは、脂肪細胞に由来するmRNAを使用してLambda GT11で構築されました。推定されたアミノ酸（AA）配列は、リーダーペプチドとして解釈される17 AAのストレッチから始まります。オープンリーディングフレームは448 AA残基で続き、TGAストップコドンで終了します。以前のデータと組み合わせて、この情報により、リパーゼ分子内のドメインの割り当てが可能になります。ヘパリン結合部位の可能性のある候補は、アポリポタンパク質EおよびBの受容体結合部位のコンセンサスシーケンスに類似した5つの正電荷を含む9-AAストレッチです。いくつかの組織からのポリアデニル化RNAの分析は、脂肪細胞、心筋、乳腺における高レベルの発現を示しています。肝臓でリポタンパク質リパーゼmRNAを検出することはできませんでした。ノーザンブロットは、それぞれ3.8 kb、3.3 kb、および2.1 kbに対応するサイズの3つの主要なmRNAを明らかにしました。脂肪細胞と心筋では、推定サイズが4.5 kbの4番目のmRNAも検出されました。サザンブロッティングによるゲノムDNAの分析により、リポタンパク質リパーゼをコードする単一の遺伝子遺伝子座が示されました。したがって、主要な転写産物の修正は、さまざまなmRNAの生産に関与しているようです。
We have isolated and sequenced cDNA clones covering the entire coding sequence and short flanking regions of guinea pig lipoprotein lipase. The expression cDNA library used was constructed in lambda gt11 with mRNA derived from adipocytes. The deduced amino acid (aa) sequence starts with a stretch of 17 aa interpreted as a leader peptide. The open reading frame continues with 448 aa residues and ends with a TGA stop codon. Combined with previous data this information allows the assignment of domains in the lipase molecule. A likely candidate for the heparin-binding site is a 9-aa stretch containing five positive charges, analogous to the consensus sequence for receptor-binding sites on apolipoproteins E and B. A previously noted homology to pancreatic lipase is extended. Analysis of polyadenylated RNA from several tissues indicated a high level of expression in adipocytes, heart muscle and mammary gland. No lipoprotein lipase mRNA could be detected in liver. Northern blots revealed three major mRNAs with sizes corresponding to 3.8 kb, 3.3 kb and 2.1 kb, respectively. In adipocytes and heart muscle a fourth mRNA, with an estimated size of 4.5 kb, was also detected. Analysis of genomic DNA by Southern blotting indicated a single gene locus coding for lipoprotein lipase. Hence, modification of the primary transcript seems to be involved in the production of the various mRNAs.
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