T7 RNAポリメラーゼ：プロモーター構造とポリメラーゼ結合

ファージ固有のT7 RNAポリメラーゼによって認識される2つのプロモーターの配列が提示されています。2つは順番に同一ですが、+1と表された開始点からの1つの塩基対の場合、-15の位置に+1に示されます。共通：式：（テキストを参照）、シーケンスには、6つのベースペアボックスの中心として2倍の軸を持つ、ボックスで示されるハイフン化された2倍の対称性の領域も含まれます。重い線は、相同性の程度を示しています。最初のプロモーター（a）は、遺伝子1、ポリメラーゼ自体の遺伝子、およびこのプロモーターから転写されたメッセージへの40の塩基内にあることが実証されています。遺伝子1と1.1を分離するR Nase III部位が見つかります。T7 RNAポリメラーゼのこれらのプロモーターへの結合は、プロモーターでの塩基ペアの部分融解と一致する塩基発色団の高濃度の青いシフトに関連しています。これらのプロモーターへのT7 RNAポリメラーゼの結合は、低温および低温で消失し、その結果としてポリメラーゼ活性の損失が伴います。結合ステップのpH依存性は、7.0の単一のPKによって適切に記述されています。ポリメラーゼ触媒活性は、プロモーター結合ではなく、約7.8のPKAを持つ酵素の単一の遊離スルフヒドリル基を必要とします。

The sequences of two promoters recognized by the phage-specificied T7 RNA polymerase are presented. The two are identical in sequence but for one base pair from the initiation point (as determined by the 5' sequence of the transcripts), denoted +1, to position -15. The common : formula: (see text), sequence also includes a region of hyphenated twofold symmetry indicated by the boxes, with the twofold axis as the center of the six base-pair box. The heavy line indicates the extent of homology. The first promoter (A) is demonstrated to lie within gene 1, the gene for the polymerase itself, and 40 bases into the message transcribed from this promoter is found the R Nase III site separating genes 1 and 1.1. Binding of T7 RNA polymerase to these promoters is associated with a hyperchromic blue shift of the base chromophores consistent with partial melting of the base pairs at the promoter. Binding of T7 RNA polymerase to these promoters disappears at low pH and low temperature and is accompanied by a consequent loss of polymerase activity. The pH dependence of the binding step is adequately described by a single pK of 7.0. Polymerase catalytic activity, but not promoter binding, requires a single free sulfhydryl group of the enzyme with a pKa of approximately 7.8.