Blautia coccoides JCM1395Tは、最小限の炎症で腫瘍内成長を達成しました：最適化されたサンプル調製とコロニーPCR法による生きた細菌治療の可能性の証拠

Blautia coccoides JCM1395Tが、腫瘍標的の生きた細菌治療に使用される可能性があることを実証します。in vivoの生体内分布を研究する前に、生体組織における細菌の信頼できる定量的分析のためのサンプル調製方法が必要でした。グラム陽性細菌には、ペプチドグリカンの厚い外層があり、それがコロニーPCRの16S rRNA遺伝子の抽出を妨げました。問題を解決するために、次の方法を開発しました。開発した方法は次のとおりです。分離組織のホモジネートを寒天培地に播種し、細菌をコロニーとして分離しました。各コロニーを熱処理し、ガラスビーズで粉砕し、さらに制限酵素で処理して、コロニーPCRのDNAを切断しました。この方法では、Blautia coccoides JCM1395TおよびBacteroides vulgatus JCM5826Tは、混合物を静脈内投与するマウスの腫瘍から個別に検出されました。この方法は非常にシンプルで再現性があり、遺伝的修飾が含まれていないため、広範囲の細菌種の探索に適用できます。特に、Blautia coccoides JCM1395Tは、腫瘍を含むマウスに静脈内注射すると、腫瘍で効率的に増殖することを示しています。さらに、これらの細菌は、最小限の自然免疫反応、すなわち、血清腫瘍壊死因子αおよびインターロイキン-6の上昇を示しました。

We demonstrate that Blautia coccoides JCM1395T has the potential to be used for tumor-targeted live bacterial therapeutics. Prior to studying its in vivo biodistribution, a sample preparation method for reliable quantitative analysis of bacteria in biological tissues was required. Gram-positive bacteria have a thick outer layer of peptidoglycans, which hindered the extraction of 16S rRNA genes for colony PCR. We developed the following method to solve the issue; the method we developed is as follows. The homogenates of the isolated tissue were seeded on agar medium, and bacteria were isolated as colonies. Each colony was heat-treated, crushed with glass beads, and further treated with restriction enzymes to cleave DNAs for colony PCR. With this method, Blautia coccoides JCM1395T and Bacteroides vulgatus JCM5826T were individually detected from tumors in mice intravenously receiving their mixture. Since this method is very simple and reproducible, and does not involve any genetic modification, it can be applied to exploring a wide range of bacterial species. We especially demonstrate that Blautia coccoides JCM1395T efficiently proliferate in tumors when intravenously injected into tumor-bearing mice. Furthermore, these bacteria showed minimal innate immunological responses, i.e., elevated serum tumor necrosis factor α and interleukin-6, similar to Bifidobacterium sp., which was previously studied as a therapeutic agent with a small immunostimulating effect.