コンカナバリンAのアフィニティクロマトグラフィーによる酵素免疫測定のためのペルオキシダーゼ結合抗体の精製

高感度の酵素免疫測定法のために、非常に少量の非共役抗体で汚染されたペルオキシダーゼ結合抗体の調製について説明します。精製プロセスは、コンカナバリンA（Con A）の抗体とペルオキシダーゼ結合抗体の異なる親和性に依存しています。ペルオキシダーゼおよび放射性標識IgGの単独またはcon a-セファロースカラムへの混合物としての適用により、IgGの62〜83％とペルオキシダーゼの0％が開始条件下で溶出することが示されましたが、ペルオキシダーゼの70〜83％、約6％の6％がIGGは適切なバッファーで溶出できます。結合化されていない抗体によるコンジュゲートの汚染は、精製される混合物中の結合化と結合化の比に依存しています。ペルオキシダーゼと共役化されたIgGでこの手順を使用して、比率が約2：1の共役IgGの比率で、比率が0.1：1に変更された準備が得られました。

Preparation of peroxidase-conjugated antibody contaminated with very small amounts of unconjugated antibody for highly sensitive enzyme immunoassays is described. The purification process is dependent upon the differential affinity of antibody and peroxidase-conjugated antibody for concanavalin A (Con A). Application of peroxidase and radioactive labelled IgG alone or as a mixture to Con A-Sepharose columns showed that 62-83% of IgG and 0% of peroxidase could be eluted under starting conditions, while 70-83% of peroxidase and about 6% of IgG could be eluted with appropriate buffer. The contamination of the conjugate with unconjugated antibody is dependent on the ratio of conjugated to unconjugated antibody in the mixture to be purified. Using this procedure on IgG conjugated with peroxidase with a ratio of unconjugated to conjugated IgG of about 2 : 1 a preparation was obtained where the ratio was changed to 0.1 : 1.