熱シフトアッセイによるタンパク質安定化のための緩衝液と添加剤のスクリーニング：実用的なアプローチ

微分スキャン蛍光測定（DSF）またはThermofluorによっても一般的に設計された熱シフトアッセイ（TSA）は、無数のアプリケーションで役立つ、比較的簡単に実装して実行できる技術です。汎用性に加えて、それはかなり安価であり、ハイスループットアプローチに適しています。TSAは、蛍光色素を使用して、研究中のタンパク質の熱変性を監視し、その融解温度（TM）を決定します。その主なアプリケーションの1つは、タンパク質の安定性を高める最良のバッファーと添加物を特定することです。TSA動作モードと主な方法論的手順は、効果的な実験を設計し、意味のある結論を取得するための中心的な鍵です。この章では、さまざまなトラブルシューティングのヒントを備えた簡単なTSAプロトコルを提示して、バッファーや添加物などの効果的なタンパク質安定剤、およびデータ処理と分析をスクリーニングすることを目的としています。TSAの結果は、目的のタンパク質が安定しているため、さらなる生物物理学的および構造的特性評価を実行するのに適している条件を提供します。

Thermal shift assay (TSA), also commonly designed by differential scanning fluorimetry (DSF) or ThermoFluor, is a technique relatively easy to implement and perform, useful in a myriad of applications. In addition to versatility, it is also rather inexpensive, making it suitable for high-throughput approaches. TSA uses a fluorescent dye to monitor the thermal denaturation of the protein under study and determine its melting temperature (Tm). One of its main applications is to identify the best buffers and additives that enhance protein stability.Understanding the TSA operating mode and the main methodological steps is a central key to designing effective experiments and retrieving meaningful conclusions. This chapter intends to present a straightforward TSA protocol, with different troubleshooting tips, to screen effective protein stabilizers such as buffers and additives, as well as data treatment and analysis. TSA results provide conditions in which the protein of interest is stable and therefore suitable to carry out further biophysical and structural characterization.