プラスミド複製機能II抗生物質耐性プラスミドR6-5のRepa複製領域のクローニング分析

R6-5は、分子長102 kbであり、いくつかの抗生物質（クロランフェニコール、フシジン酸、カナマイシン、ストレプトマイシン、スルホンアミド）および水銀塩に対する耐性を指定する、共役、共役、FIIの非互換性グループプラスミドです。in vitroクローニング手順により、長さはわずか2.6 kbのR6-5の本質的な領域からのDNAセグメントを含むミニプラスミドが生成されました。親プラスミドに隣接する2つのPSTIフラグメントで構成されるこのDNAセグメントは、R6-5の調節された複製と非互換性特性に必要なすべての遺伝子と配列を、複製の起源、ORIV、その重要な機能を含む、指定されたレパ、およびコピー制御機能、COP。23,000、10,000、9,500ダルトンのモノマー分子量を持つ3つの異なるポリペプチドは、R6-5必須領域のDNAセグメントを含むPBR322ハイブリッドプラスミドを運ぶミニセルによって検出可能な量で合成されます。R6-5の複製起点を運ぶPBR322ハイブリッドプラスミドの自発的な欠失誘導体が分離されました。この誘導体プラスミドのヘテロドゥプレックス分析は、削除されたDNAセグメントがR6-5複製起点を持ち、その末端が短い反転反復シーケンスで構成されていることを示しています。

R6-5 is a low copy number, conjugative, FII incompatibility group plasmid that has a molecular length of 102 kb and that specifies resistance against several antibiotics (chloramphenicol, fusidic acid, kanamycin, streptomycin and sulphonamide) and mercury salts. By means of in vitro cloning procedures, mini plasmids have been generated that contain a DNA segment from the essential region of R6-5 that is only 2.6 kb in length. This DNA segment, which consists of two PstI fragments that are adjacent in the parent plasmid, carries all genes and sequences required for the regulated replication and incompatibility properties of R6-5, including its origin of replication, OriV, an essential function that has been designated RepA, and the copy control function, Cop. Three different polypeptides, having monomer molecular weights of 23,000, 10,000 and 9,500 daltons, are synthesized in detectable quantities by minicells carrying pBR322 hybrid plasmids that contain DNA segments from the R6-5 essential region. A spontaneous deletion derivative of a pBR322 hybrid plasmid that carries the R6-5 origin of replication was isolated. Heteroduplex analysis of this derivative plasmid indicates that the deleted DNA segment carries the R6-5 replication origin and that its termini consist of short inverted repeat sequences.