RHOA-ROCK1/ROCK2経路は、不死化および一次ミクログリアの炎症性シグナル伝達を悪化させます

神経炎症は、すべての急性中枢神経系（CNS）損傷および慢性神経変性障害の中で統一因子です。ここでは、不死化ミクログリア（IMG）細胞と一次ミクログリア（PMG）を使用して、GTPase RASホモログファミリーメンバーA（RHOA）の役割とその下流の標的Rho関連コイルコイル含有プロテインキナーゼ1および2（Neuro inflammationにおけるROCK1およびROCK2）。パンキナーゼ阻害剤（Y27632）とROCK1およびROCK2特異的阻害剤（RKI1447）を使用して、リポ多糖（LPS）チャレンジを緩和しました。IMG細胞とPMGの両方で、各薬物は媒体で検出された炎症誘発性タンパク質産生を有意に阻害しました（TNF-α、IL-6、KC/GRO、およびIL-12p70）。IMG細胞では、これはNF-κB核転座の阻害と神経炎症遺伝子転写（INOS、TNF-α、およびIL-6）のブロックに起因しました。さらに、両方の化合物がコフィリンの脱リン酸化と活性化をブロックする能力を実証しました。IMG細胞では、NOGO-P4またはナルシクラシン（NARC）によるRhoA活性化は、LPSチャレンジに対する炎症反応を悪化させました。LPSの課題中にROCK1およびROCK2活性を区別するためにsiRNAアプローチを利用し、両方のタンパク質の遮断がY27632とRKI1447の抗炎症効果を媒介する可能性があることを示しました。以前に公開されたデータを使用して、RHOA/ROCKシグナル伝達カスケードの遺伝子が、APP/PS-1トランスジェニックアルツハイマー病（AD）マウスからの神経変性ミクログリア（MGND）で高度に上方制御されていることを示しています。神経炎症におけるRHOA/ROCKシグナル伝達の特定の役割を照らしたことに加えて、細胞研究における一次ミクログリアのモデルとしてIMG細胞を使用する有用性を示します。

Neuroinflammation is a unifying factor among all acute central nervous system (CNS) injuries and chronic neurodegenerative disorders. Here, we used immortalized microglial (IMG) cells and primary microglia (PMg) to understand the roles of the GTPase Ras homolog gene family member A (RhoA) and its downstream targets Rho-associated coiled-coil-containing protein kinases 1 and 2 (ROCK1 and ROCK2) in neuroinflammation. We used a pan-kinase inhibitor (Y27632) and a ROCK1- and ROCK2-specific inhibitor (RKI1447) to mitigate a lipopolysaccharide (LPS) challenge. In both the IMG cells and PMg, each drug significantly inhibited pro-inflammatory protein production detected in media (TNF-α, IL-6, KC/GRO, and IL-12p70). In the IMG cells, this resulted from the inhibition of NF-κB nuclear translocation and the blocking of neuroinflammatory gene transcription (iNOS, TNF-α, and IL-6). Additionally, we demonstrated the ability of both compounds to block the dephosphorylation and activation of cofilin. In the IMG cells, RhoA activation with Nogo-P4 or narciclasine (Narc) exacerbated the inflammatory response to the LPS challenge. We utilized a siRNA approach to differentiate ROCK1 and ROCK2 activity during the LPS challenges and showed that the blockade of both proteins may mediate the anti-inflammatory effects of Y27632 and RKI1447. Using previously published data, we show that genes in the RhoA/ROCK signaling cascade are highly upregulated in the neurodegenerative microglia (MGnD) from APP/PS-1 transgenic Alzheimer's disease (AD) mice. In addition to illuminating the specific roles of RhoA/ROCK signaling in neuroinflammation, we demonstrate the utility of using IMG cells as a model for primary microglia in cellular studies.