フェニルボルオニック酸固形相抽出によるヒト尿中の11-NOR-9-Carboxy-∆9-Tetrahydrocannabinolの分析のための迅速な調製方法の開発

大麻ユーザーからの尿の分析のための迅速な準備方法が確立されました。一般に、Δ9-テトラヒドロカンナビノール（THC）の主要な代謝物の1つである11-Nor-9-Carboxy-∆9-Tetrahydrocannabinol（THC-COOH）は、大麻の使用を検証するためにユーザーの尿から検出する必要があります。ただし、既存の準備方法は通常、多段階と時間のかかるプロセスです。液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）による分析の前に、β-グルクロニダーゼまたはアルカリ性溶液での治療による脱共役、液液抽出または固相抽出（SPE）、および蒸発が一般的に行われます。さらに、ガスクロマトグラフィー質量分析（GC/MS）分析には、その後の誘導体化（シリル化またはメチル化）が確かに必要です。ここでは、Cis-diol部分で化合物を選択的に結合するフェニルボロン酸（PBA）SPEに焦点を当てました。THC-COOHは、シスジオール部分を持つグルクロニドコンジュゲート（THC-COOGLU）として代謝されます。したがって、運転時間を短縮するためにその保持と溶出の条件を調査しました。4つの溶出条件を開発しました。これは、THC-COOGLUの酸性溶出、THC-COOH用のアルカリ溶出、THC-COOHメチルエステル（THC-COOME）のメタノリシス溶出、およびメタノリシルシス溶解とOのメチルエーテル化の後に、-methyl-thc-coome（o-me-thc-coome）。この研究では、すべての再現性と回復率がLC-MS/MSによって評価されました。その結果、これらの4つの経路には短い時間（10〜25分以内）が必要であり、良好な再現性と回復率を示しました。経路I-IVの検出限界は、それぞれ10.8、1.7、18.9、および13.8 ng ML-1でした。定量化の下限は、それぞれ62.5、31.25、57.3、および62.5 ng ML-1でした。大麻使用の証明が必要な場合、所有する参照基準と分析機器に一致するように溶出条件を選択できます。私たちの知る限り、これは大麻を含む尿サンプルの調製にPBA SPEを使用し、PBAキャリアから溶出する際に部分的な誘導体化を達成するための最初の報告です。私たちの方法は、大麻使用者からの尿サンプルの準備のための新しい実用的なソリューションを提供できます。PBA SPEメソッドは、1,2-ジオール部分がないため、尿中のTHC-COOHを回復することはできませんが、この方法にはプロセスを簡素化し、動作時間を短縮するための技術的な利点があり、それにより人間の誤りが回避されます。

A rapid preparation method for the analysis of the urine from a cannabis user was established. Generally, 11-nor-9-carboxy-∆9-tetrahydrocannabinol (THC-COOH), which is one of the main metabolites of ∆9-tetrahydorocannabinol (THC), must be detected from a user's urine to verify cannabis use. However, existing preparation methods are usually multistep and time-consuming processes. Before the analysis by liquid-chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), deconjugation by treatment with β-glucuronidase or alkaline solution, liquid-liquid extraction or solid-phase extraction (SPE), and evaporation are generally performed. In addition, subsequent derivatization (silylation or methylation) are certainly necessary for gas-chromatography mass spectrometry (GC/MS) analysis. Here, we focused on the phenylboronic-acid (PBA) SPE, which selectively binds compounds with a cis-diol moiety. THC-COOH is metabolized as a glucuronide conjugate (THC-COOGlu) which has cis-diol moieties, therefore, we investigated the conditions of its retention and elution to reduce the operating time. We developed four elution conditions, which afford the following derivatives: acidic elution for THC-COOGlu, alkaline elution for THC-COOH, methanolysis elution for the THC-COOH methyl ester (THC-COOMe), and methanolysis elution and following methyl etherification for O-methyl-THC-COOMe (O-Me-THC-COOMe). All repeatability and recovery rates were evaluated by LC-MS/MS in this study. As a result, these four pathways required short times (within 10-25 min) and exhibited good repeatability and recovery rates. Detection limits of pathway I-IV were 10.8, 1.7, 18.9, and 13.8 ng mL-1, respectively. Lower limits of quantification were 62.5, 31.25, 57.3, and 62.5 ng mL-1, respectively. When proof of cannabis use is required, any elution condition can be selected to match the possessing reference standards and analytical instruments. To our knowledge, this is the first report of using PBA SPE for the preparation of the urine samples containing cannabis and achieving partial derivatization when eluting from a PBA carrier. Our method can provide a new and practical solution for the preparation of the urine samples from cannabis users. Although the PBA SPE method cannot recover THC-COOH in urine because of its lack of a 1,2-diol moiety, this method has technological advantages for simplifying the process and reducing the operating time, thereby avoiding human errors.