低レベルの内因性コリンエステラーゼは、牛乳中のヒトブチリルコリンエステラーゼのトランスジェニック発現のために牛、羊、ヤギの選択をサポートしています

ヒト血漿（Hu Bche）および組換え（R）Hu Bcheから精製されたブチリルコリンエステラーゼは、有機リン化合物（OP）の毒性からヒトを保護できる候補酵素です。牛、豚、羊、ヤギなどの家畜は、さまざまな貴重な治療タンパク質のトランスジェニック発現に使用されています。実際、Rhu Bcheはトランスジェニックヤギの牛乳で成功裏に発現しましたが、牛乳中の内因性コリンエステラーゼ（CHE）の存在は、発現Rhu Bcheの分離を妨げます。この研究の目的は、Rhu Bcheの生産にこれらの種の適合性を決定するために、ウシ、オーバイン、カプリン、およびブタ乳における内因性CHEの存在を決定することでした。アセチルおよびブチリルチオコリンを基質として使用して、CHE活性（2-4 U/mL）がブタの牛乳のみで検出されました。他の動物の牛乳中のCHE活動は0.01 U/mL未満であり、プロカイナミド - セファロースゲルの濃縮後にのみ検出できました。アセチルコリンエステラーゼ（AChE）またはBCHE特異的阻害剤の存在下での測定活性に基づく2つの異なる方法を使用して、濃縮牛乳のAChEおよびBCHE活性の割合を推定しました。反min動物のみからの痛みを認識する胎児のウシ血清痛に対するモノクローナル抗体（mAb）も、痛みの同一性を確認するために使用されました。ウシとオーバインの牛乳には痛みとBCHEの両方の活性が含まれていましたが、カプリンとブタ乳には主にBCHE活性が含まれていました。非常に低いCHE活動の存在は、牛乳中のRhu Bcheのトランスジェニック発現のために牛、羊、ヤギの選択をサポートします。

Butyrylcholinesterase purified from human plasma (Hu BChE) as well as recombinant (r) Hu BChE are candidate enzymes that can protect humans from toxicity of organophosphorus compounds (OPs). Domestic animals such as cows, pigs, sheep, and goats have been used for the transgenic expression of a variety of valuable therapeutic proteins. Indeed, rHu BChE was successfully expressed in the milk of transgenic goats, but the presence of any endogenous cholinesterases (ChE) in milk would interfere with the isolation of expressed rHu BChE. The aim of this study was to determine the presence of endogenous ChEs in bovine, ovine, caprine, and porcine milk to determine the suitability of these species for the production of rHu BChE. Using acetyl- and butyryl- thiocholine as substrates, ChE activity (2-4 U/mL) was detected in pig milk only. ChE activities in milk from other animals were <0.01 U/mL and could only be detected following enrichment on procainamide-Sepharose gel. Two different methods based on measuring activity in the presence of acetylcholinesterase (AChE)- or BChE- specific inhibitors were used to estimate the proportions of AChE and BChE activities in enriched milk. Monoclonal antibodies (MAbs), against fetal bovine serum AChE that recognize AChEs from ruminants only, were also used to confirm the identity of AChEs. While bovine and ovine milk contained both AChE and BChE activities, caprine and porcine milk contained predominantly BChE activity. The presence of very low ChE activity supports the choice of cows, sheep, and goats for the transgenic expression of rHu BChE in milk.