ホスファチジルエタノール（PETH）の自動サンプル調製によるLC-MS/MSアッセイの開発 - 典型的な臨床マーカーではありません

ホスファチジルエタノール（PETH）は、赤血球膜上にエタノールの存在下でのみ形成されたリン脂質のグループであり、臨床参照間隔が確立された長期エタノール消費のための直接的なバイオマーカーとなっています。ここでは、人間の全血からの2つの最も豊富なPethホモログ、Peth 16：0/18：1およびPeth 16：0/18：2の定量化のためのアッセイについて説明し、開発プロセス全体で克服する課題を説明します。PETHは赤血球膜内に局在しているため、信頼できるサンプル調製技術はPETH分析の重要な側面です。したがって、外因的にスパイクされた標準とコントロールの回復のためのさまざまな赤血球溶解剤を評価して、本物のサンプルで見つかった内因性分析物の回復に匹敵するものを特定しました。液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）分析とともに、自動化されたサンプル調製、適切なクロマトグラフィー分解能、および最小システムのキャリーオーバーを可能にするサンプルクリーンアップと濃縮には、サポートされている液体抽出（SLE）技術が採用されました。これにより、10-1000 ng/ml（勾配= 0.9902-1.0138、R2 = 0.9958-0.9972）の分析測定範囲（AMR）を備えた実験室開発テストが行われました。日中の精度：AMRよりも4.4-8.2％）、利用可能な外部臨床検査（勾配= 0.9943-1.0206、R2 = 0.9635-0.9678、決定点の解釈が低い）と比較した場合、効果的な分析対象物の回復（77.2）-83.5％）、および確立された安定性の特性、同時に、反対の分析物の同位体分布による加法効果を確保するために分析物をクロマトグラフィー的に分離します。

Phosphatidylethanol (PEth) is a group of phospholipids formed exclusively in the presence of ethanol on the erythrocyte membrane, making it a direct biomarker for long-term ethanol consumption for which a clinical reference interval has been established. Here, we describe an assay for quantitation for two most abundant PEth homologues, PEth 16:0/18:1 and PEth 16:0/18:2, from human whole blood, and present challenges overcome throughout the development process. Since PEth is localized within erythrocyte membranes, a reliable sample preparation technique is an important aspect of PEth analysis. Therefore, various erythrocyte lysing agents for recovery of exogenously spiked standards and controls were evaluated to identify one that performed comparably to the recovery of endogenous analytes found in authentic samples. A supported liquid extraction (SLE) technique was employed for sample cleanup and enrichment which together with liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) analysis enabled automated sample preparation, appropriate chromatographic resolution, and minimal system carryover. This resulted in a laboratory developed test with an analytical measurement range (AMR) of 10-1000 ng/mL (slope = 0.9902-1.0138, R2 = 0.9958-0.9972), that was precise (intra-day precision: 3.4-4.1%; inter-day precision: 4.4-8.2% over the AMR), accurate when compared with an available external laboratory test (slope = 0.9943-1.0206, R2 = 0.9635-0.9678, no lower decision point interpretation changes), with effective analyte recovery (77.2-83.5%), and established stability characteristics, while chromatographically separating the analytes to ensure no additive effects due to the isotopic distribution of the opposing analyte.