ドロップブロット：化学的に固定された癌細胞のシングルセルウエスタンブロッティング

翻訳研究のためのアーカイブされた組織のプロテオミクスをさらに実現するために、個々の化学的に固定された細胞からの高特性、高感度タンパク質検出のためのハイブリッドマイクロ流体プラットフォームを導入します。処理から分析へのワークフローを合理化し、信号損失を最小限に抑えるために、ドロップブロットは、マイクロウェルベースの抗原抽出を含む統一された分析を使用して、単一の固定細胞からの液滴ベースの抗原回復を使用して、サンプル準備を連続的に統合します。セルウエスタンブロッティング。油液液滴の製剤は、十分な抗原回復に必要な過酷な化学物質（SDS、6M尿素）および熱条件（98°C、1-2時間）に堅牢であることを証明し、回収抗原の電気伝達に必要な電気機械的条件が必要ですマイクロウェルカプセル化された液滴から単一細胞電気泳動まで。タンパク質標的検索は、固定されていない、パラホルムアルデヒド（PFA）、およびメタノール固定細胞について実証されました。両方の固定化学からの主要標的（HER2、GAPDH、EPCAM、ビメンチン）に対して十分な免疫反応性が確認されたPFA固定細胞からのより高いタンパク質電気泳動分離分解能が観察されました。エプカムとビメンチンの複数の形態が検出されました。これは、ウエスタンブロット分析の特徴的な強度です。PFA固定ヒト由来の乳房腫瘍標本（n = 5）のドロップブロットは、6年間凍結された細胞から抗原回復を示しました。Dropblotは、貴重な生物脊柱リポジトリのシングルセル解像度タンパク質バイオマーカーマイニングに精密統合ワークフローを提供できます。

To further realize proteomics of archived tissues for translational research, we introduce a hybrid microfluidic platform for high-specificity, high-sensitivity protein detection from individual chemically fixed cells. To streamline processing-to-analysis workflows and minimize signal loss, DropBlot serially integrates sample preparation using droplet-based antigen retrieval from single fixed cells with unified analysis-on-a-chip comprising microwell-based antigen extraction followed by chip-based single-cell western blotting. A water-in-oil droplet formulation proves robust to the harsh chemical (SDS, 6M urea) and thermal conditions (98°C, 1-2 hr.) required for sufficient antigen retrieval, and the electromechanical conditions required for electrotransfer of retrieved antigen from microwell-encapsulated droplets to single-cell electrophoresis. Protein-target retrieval was demonstrated for unfixed, paraformaldehyde-(PFA), and methanol-fixed cells. We observed higher protein electrophoresis separation resolution from PFA-fixed cells with sufficient immunoreactivity confirmed for key targets (HER2, GAPDH, EpCAM, Vimentin) from both fixation chemistries. Multiple forms of EpCAM and Vimentin were detected, a hallmark strength of western-blot analysis. DropBlot of PFA-fixed human-derived breast tumor specimens (n = 5) showed antigen retrieval from cells archived frozen for 6 yrs. DropBlot could provide a precision integrated workflow for single-cell resolution protein-biomarker mining of precious biospecimen repositories.