小分子によってトリガーされた自己切断タグを介したタンパク質のC末端修飾と機能化

プロテインC末端の正確な修正または機能化は不可欠ですが、課題に満ちています。本明細書では、C末端を修飾する化学的アプローチは、関心のタンパク質のC末端にシステインプロテアーゼドメインを融合することにより開発され、INSP6トリガーされたシステインプロテアーゼドメイン自己自己による非酵素C末端機能化を達成できる可能性がある切断。この方法は、プロテインC末端の機能化を実現するための非常に効率的な方法を示しており、幅広いアミン含有分子とタンパク質と互換性があります。さらに、C末端C末端の機能化は、C末端修飾タンパク質をシステインプロテアーゼドメインおよびINSP6とインキュベートすることにより発見され、タンパク質の機能化と官能化のためのツールを提供します。最後に、ナノボディ薬物コンジュゲートの部位固有のアセンブリ、二官能性抗体の構築、C末端蛍光標識、およびC末端トランスペプチドおよびC末端トランスペプチドの構築によって実証されているように、この研究ではプロテインC末端機能化のさまざまな用途が提供されます。グリコシル化。

The precise modification or functionalization of the protein C-terminus is essential but full of challenges. Herein, a chemical approach to modify the C-terminus is developed by fusing a cysteine protease domain on the C-terminus of the protein of interest, which could achieve the non-enzymatic C-terminal functionalization by InsP6-triggered cysteine protease domain self-cleavage. This method demonstrates a highly efficient way to achieve protein C-terminal functionalization and is compatible with a wide range of amine-containing molecules and proteins. Additionally, a reversible C-terminal de-functionalization is found by incubating the C-terminal modified proteins with cysteine protease domain and InsP6, providing a tool for protein functionalization and de-functionalization. Last, various applications of protein C-terminal functionalization are provided in this work, as demonstrated by the site-specific assembly of nanobody drug conjugates, the construction of a bifunctional antibody, the C-terminal fluorescent labeling, and the C-terminal transpeptidation and glycosylation.