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背景：NME2ABE8Eは、より制限性の低いジヌクレオチドプロトスケルアジャセントモチーフ（PAM：N4CC）を備えたコンパクトで正確なアデニンベースエディターとして構築および特徴付けられていますが、ヒト細胞の困難な遺伝子座での編集効率が低い。ここでは、ドメインに入れられたNME2CAS9ベースエディターのサブセットを設計して、編集効率を改善するためにデアミナーゼドメインを非標的鎖に近づけました。 結果：我々の結果は、アミノ酸797と798の間に挿入されたアデニンデアミナーゼを備えたNme2ABE8E-797が、哺乳類細胞の4〜18塩基の広い編集ウィンドウで、特に編集するのが困難な場所で編集効率が大幅に増加していることを実証しました。nme2abe8e。さらに、Nme2ABE8E-797のPAM相互作用ドメインをSMUCAS9のそれと交換するか、NME2ABE8E-797でENME2-Cの点変異を導入することにより、NME2ABE-797SMUおよびNME2ABE8E-CY-8E-Cのポイント変異をそれぞれ作成しました。ヒト細胞にN4CN PAMを持つ幅広い部位。さらに、修正されたドメインに入れられたNME2ABE8Eは、神経-2A細胞およびマウスに疾患関連遺伝子座を効率的に回復または設置できます。 結論：ターゲット上のDNA編集の増加とPAM互換性の拡大により、これらの新しいNME2ABE8ESは、効率的な遺伝子修飾と治療用途のためのベース編集ツールセットを拡張します。
背景：NME2ABE8Eは、より制限性の低いジヌクレオチドプロトスケルアジャセントモチーフ（PAM：N4CC）を備えたコンパクトで正確なアデニンベースエディターとして構築および特徴付けられていますが、ヒト細胞の困難な遺伝子座での編集効率が低い。ここでは、ドメインに入れられたNME2CAS9ベースエディターのサブセットを設計して、編集効率を改善するためにデアミナーゼドメインを非標的鎖に近づけました。 結果：我々の結果は、アミノ酸797と798の間に挿入されたアデニンデアミナーゼを備えたNme2ABE8E-797が、哺乳類細胞の4〜18塩基の広い編集ウィンドウで、特に編集するのが困難な場所で編集効率が大幅に増加していることを実証しました。nme2abe8e。さらに、Nme2ABE8E-797のPAM相互作用ドメインをSMUCAS9のそれと交換するか、NME2ABE8E-797でENME2-Cの点変異を導入することにより、NME2ABE-797SMUおよびNME2ABE8E-CY-8E-Cのポイント変異をそれぞれ作成しました。ヒト細胞にN4CN PAMを持つ幅広い部位。さらに、修正されたドメインに入れられたNME2ABE8Eは、神経-2A細胞およびマウスに疾患関連遺伝子座を効率的に回復または設置できます。 結論：ターゲット上のDNA編集の増加とPAM互換性の拡大により、これらの新しいNME2ABE8ESは、効率的な遺伝子修飾と治療用途のためのベース編集ツールセットを拡張します。
BACKGROUND: Nme2ABE8e has been constructed and characterized as a compact, accurate adenine base editor with a less restrictive dinucleotide protospacer-adjacent motif (PAM: N4CC) but low editing efficiency at challenging loci in human cells. Here, we engineered a subset of domain-inlaid Nme2Cas9 base editors to bring the deaminase domain closer to the nontarget strand to improve editing efficiency. RESULTS: Our results demonstrated that Nme2ABE8e-797 with adenine deaminase inserted between amino acids 797 and 798 has a significantly increased editing efficiency with a wide editing window ranging from 4 to 18 bases in mammalian cells, especially at the sites that were difficult to edit by Nme2ABE8e. In addition, by swapping the PAM-interacting domain of Nme2ABE8e-797 with that of SmuCas9 or introducing point mutations of eNme2-C in Nme2ABE8e-797, we created Nme2ABE8e-797Smu and Nme2ABE8e-797-C, respectively, which exhibited robust activities at a wide range of sites with N4CN PAMs in human cells. Moreover, the modified domain-inlaid Nme2ABE8e can efficiently restore or install disease-related loci in Neuro-2a cells and mice. CONCLUSIONS: These novel Nme2ABE8es with increased on-target DNA editing and expanded PAM compatibility will expand the base editing toolset for efficient gene modification and therapeutic applications.
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